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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 有关western blot 的问题
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searush

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-01-14 09:31:22
据我做WB的经验，你这个结果还是没什么本质问题的。我认为可能还是实验过程中操作误差带来的（例如：转膜的时候膜不小心动了一下）。仔细观察两条带的话，不难发现，上下的两条带虽然不在同一个位置，但是应该是 ...

谢谢，我想问下会不会是蛋白在电泳过程中，到分离胶时目的蛋白没有到同一水平线上，有一部分是在后面造成的。
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学术研究
11楼2015-01-14 13:41:11
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searush

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-01-14 09:34:36
还有一个很好办的方法，你观察你的marker，如果marker也是和蛋白的条带一样，都出现双条带的话，就说明了不是样品的问题，而是操作过程中出现的误差。
如果marker是正常的，只有蛋白出现了双条带，那就是样品的问 ...

marker正常，我换成小梳子的孔加样该问题就不存在了。
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学术研究
12楼2015-01-14 13:42:33
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searush

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by molizerd at 2015-01-13 23:58:19
今天我师弟也曝成这样了。。他上样是纯化的原核表达蛋白。。抗体是他自己制备的单抗。。老师说可能是蛋白降解了。。或者你的蛋白样品是不是自己就能形成聚合体，然后成了不同大小的条带。
...

有可能 ，但是我的抗体是单抗，能识别目的蛋解聚后的两个蛋白吗？我用小梳子的孔加样，同样地方法结果出来就正常的了。不清楚为啥
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学术研究
13楼2015-01-14 13:45:26
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by searush at 2015-01-14 13:41:11
谢谢，我想问下会不会是蛋白在电泳过程中，到分离胶时目的蛋白没有到同一水平线上，有一部分是在后面造成的。...

有这种可能，但是一般如果不是上两次样的话，这种可能性是非常小的。我做SDS PAGE的时候有时候上样量大 会分两次上，可能会出现双条带这种情况。还有就是你在跑胶的时候如果电压突然改变幅度较大的话，也可能会出现双条带，有时和胶也有关系，原因多种多样，呵呵，解决了就行，当做是一次交流！
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
14楼2015-01-14 14:33:11
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曦雨后阳光

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by searush at 2015-01-14 13:42:33
marker正常，我换成小梳子的孔加样该问题就不存在了。...

你原来用的大孔梳子吗？？我用的中孔梳子，，现在也出现这种问题，到底是什么原因呀？？
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15楼2016-03-21 19:20:32
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