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searush

铜虫 (初入文坛)

[求助] 有关western blot 的问题 已有2人参与

请问下  我做的是NF-KB p65的抗体  显影结果怎么会在目的带中出现两条带呢?求解

有关western blot  的问题
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学术研究
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searush

铜虫 (初入文坛)

自己顶一个  希望 大虫们指教
学术研究
2楼2015-01-12 17:09:35
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molizerd

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
searush(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-14 20:04:55
这是压片曝光的还是显色的还是机器曝光的?
如果是压片的话是因为你压的胶片动了。其他的你这个是单抗还是多抗?

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-01-12 17:33:29
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
searush(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-14 20:05:07
除了楼上说的原因之外,还有就是你在进行PAGE的时候,是一次上样还是两次上样呢,如果是两次上样的话,也会产生这种结果的。整个实验是没什么问题的。
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-01-12 17:37:32
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searush

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by molizerd at 2015-01-12 17:33:29
这是压片曝光的还是显色的还是机器曝光的?
如果是压片的话是因为你压的胶片动了。其他的你这个是单抗还是多抗?

机器曝光的
学术研究
5楼2015-01-13 18:21:15
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searush

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-01-12 17:37:32
除了楼上说的原因之外,还有就是你在进行PAGE的时候,是一次上样还是两次上样呢,如果是两次上样的话,也会产生这种结果的。整个实验是没什么问题的。

我就上样一次而已
学术研究
6楼2015-01-13 18:21:50
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searush

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by molizerd at 2015-01-12 17:33:29
这是压片曝光的还是显色的还是机器曝光的?
如果是压片的话是因为你压的胶片动了。其他的你这个是单抗还是多抗?

单抗  CST的抗体
学术研究
7楼2015-01-13 18:22:29
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molizerd

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by searush at 2015-01-13 18:22:29
单抗  CST的抗体...

今天我师弟也曝成这样了。。他上样是纯化的原核表达蛋白。。抗体是他自己制备的单抗。。老师说可能是蛋白降解了。。或者你的蛋白样品是不是自己就能形成聚合体,然后成了不同大小的条带。

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2015-01-13 23:58:19
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
searush(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-14 20:05:22
引用回帖:
6楼: Originally posted by searush at 2015-01-13 18:21:50
我就上样一次而已...

据我做WB的经验,你这个结果还是没什么本质问题的。我认为可能还是实验过程中操作误差带来的(例如:转膜的时候膜不小心动了一下)。仔细观察两条带的话,不难发现,上下的两条带虽然不在同一个位置,但是应该是一个蛋白的。
机器曝光,采用单抗(GST的抗体或是HIS抗体),这些都是再正常不过了,况且western这个实验本身是没有太大技术含量的,呵呵,只要做的过程中操作上不出现大披露,试剂使用正确,样品确保正常,就应该会成功。
希望对你有所帮助。
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
9楼2015-01-14 09:31:22
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by searush at 2015-01-13 18:21:50
我就上样一次而已...

还有一个很好办的方法,你观察你的marker,如果marker也是和蛋白的条带一样,都出现双条带的话,就说明了不是样品的问题,而是操作过程中出现的误差。
如果marker是正常的,只有蛋白出现了双条带,那就是样品的问题了。

所以你先确定marker是否正常,谢谢
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
10楼2015-01-14 09:34:36
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