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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 小分子量蛋白在pET28中表达有什么技巧？
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susannawsj

铜虫 (初入文坛)

[求助] 小分子量蛋白在pET28中表达有什么技巧？ 已有2人参与

我有两个蛋白要在pET28中表达，分子量分别为4.3k和11.9k。我
的诱导条件是30度，160rpm，IPTG 1mM。0-12小时分别取样，SDS-page都没有条带。
但同期表达的另两个40和30k的都有很亮的带？
我怀疑是诱导条件不合适；求各位大神指教~~
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1楼 2015-01-09 13:36:44
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laojiu9878

至尊木虫 (文坛精英)

九牛

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用液相跑一下看看
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但愿人长久
4楼2015-01-10 23:05:12
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joyva

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
susannawsj: 金币+9, ★★★很有帮助 2015-06-01 11:14:20
不一定是没表达哦，可能是蛋白太小而你跑胶有问题，一般的SDS-PAGE很难观察到，因为目的蛋白都在最下面，难以分辨出来。我在做一个6.7kD和4.5kD的，用tricein-page胶跑电泳
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人生没有彩排，珍惜每一天！
2楼2015-01-09 22:12:16
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susannawsj

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by joyva at 2015-01-09 22:12:16
不一定是没表达哦，可能是蛋白太小而你跑胶有问题，一般的SDS-PAGE很难观察到，因为目的蛋白都在最下面，难以分辨出来。我在做一个6.7kD和4.5kD的，用tricein-page胶跑电泳

我也用了Tricine-SDSPAGE, 但没有条带
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3楼2015-01-10 15:59:49
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joyva

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by susannawsj at 2015-01-10 15:59:49
我也用了Tricine-SDSPAGE, 但没有条带...

你是用新鲜配制R250染色液染胶吗，我发现陈旧的染液很那染肽类
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人生没有彩排，珍惜每一天！
5楼2015-06-10 10:01:33
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