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dazhen9527

新虫 (小有名气)

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[交流] 蛋白纯化有杂带已有2人参与

目的蛋白83KDa，C端his标签，镍柱纯化过程中，总是在37KDa处伴随一条很亮的杂带，用的BL21表达菌株，pET28a表达载体！请大家多指教！

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justdoit

1楼 2014-12-25 19:46:44

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

凌波丽

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管辖: 生物科学综合

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
dazhen9527: 金币+10, 谢谢，这是一种好建议 2014-12-30 08:30:04

想了解一下出现这种原因，是因为被蛋白酶切割了，还是杂蛋白没去除干净。

只要从胶上把感兴趣的蛋白质带回收，然后测定一下N末端的10左右的氨基酸就可以确定；或者用肽谱分析——用胰蛋白酶分别切割原始蛋白质和杂带蛋白质，对比后者的裂解出的肽段斑是否包括在前者的肽段斑，不过可能有风险，因为可能降解后的蛋白质可能显露出新的酶切位点。也可以酶切后用质谱，对比原始蛋白质和杂带，但是至少对于杂带蛋白质进行局部测序是必要的，因为你并不确定杂蛋白具体有哪些。