应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白纯化有两条杂带一直去不掉……
151/2返回列表12下一页
查看: 2991  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ylz2433

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化有两条杂带一直去不掉…… 已有4人参与

我的蛋白是His标签，大约93kDa，在纯化的时候在目的蛋白下面一直有两条带去不掉，试了很多条件，像加PMSF、Tween-20、不同浓度NaCl、不同缓冲液、不同pH过Ni柱、过完Ni柱后过Q柱、过完Q柱后过Ni柱，都没什么效果。希望大神赐教啊。最上面的带是我的目的蛋白

蛋白纯化有两条杂带一直去不掉……
1.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
努力，加油！
1楼 2014-10-24 17:10:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

myheat

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果你有在his和蛋白之间加蛋白酶如tev，这样过完第一步ni后用tev_his酶切过夜，第二天再过ni柱，收集流穿或低咪唑组分。。。这样可以试试

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-10-24 21:04:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

myheat

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by ylz2433 at 2014-10-27 10:14:51
我跑native-page的时候只有一条带，所以可以确定杂带不是结合在ni柱上……我用过Qsepharose FF，没什么效果……...

不知道是什么蛋白 ，native一条带的话应该是复合体。或者是分子伴侣。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2014-10-27 10:57:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

lpzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我的也有。。。可能是蛋白讲解吧？楼主纯化后下步实验是啥？若要求不高的话，可以继续往下做
赞一下 回复此楼
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2014-10-24 17:24:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ylz2433

新虫 (小有名气)
加了蛋白酶抑制剂PMSF1mM、0.1mM哦，从一开始纯这个酶各种条件下一直有这两条杂带，，，必须得是纯的蛋白才能往下做呢，，，

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
努力，加油！
3楼2014-10-24 18:16:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ylz2433

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by myheat at 2014-10-24 21:04:01
如果你有在his和蛋白之间加蛋白酶如tev，这样过完第一步ni后用tev_his酶切过夜，第二天再过ni柱，收集流穿或低咪唑组分。。。这样可以试试

这个是什么原理呢？
赞一下 回复此楼
努力，加油！
5楼2014-10-25 17:02:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

myheat

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by ylz2433 at 2014-10-25 17:02:50
这个是什么原理呢？...

那两条咋带肯与ni柱非特异结合，伴随着洗脱一起被纯化。reload ni 就可以去掉。或者得用高分辨率的离子交换如source15q 或monoq分离

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
6楼2014-10-25 18:11:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ylz2433

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by myheat at 2014-10-25 18:11:24
那两条咋带肯与ni柱非特异结合，伴随着洗脱一起被纯化。reload ni 就可以去掉。或者得用高分辨率的离子交换如source15q 或monoq分离
...

我跑native-page的时候只有一条带，所以可以确定杂带不是结合在ni柱上……我用过Qsepharose FF，没什么效果……
赞一下 回复此楼
努力，加油！
7楼2014-10-27 10:14:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanglele87

金虫 (著名写手)
切标签反挂镍柱。
回复此楼
一生不羁放纵爱自由
9楼2014-10-28 13:17:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ylz2433

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by wanglele87 at 2014-10-28 13:17:05
切标签反挂镍柱。

切完标签还能挂上NI柱吗？
赞一下 回复此楼
努力，加油！
10楼2014-11-02 19:20:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ylz2433 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 a2tycdlnq1 2026-05-23 5/250 2026-05-24 16:21 by hhx1yx9evi
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 a2tycdlnq1 2026-05-23 4/200 2026-05-24 16:16 by hhx1yx9evi
[基金申请] 河北省自然科学基金 +6 Peterchao 2026-05-18 9/450 2026-05-24 16:02 by 130067131
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 pmo95bazuy 2026-05-23 8/400 2026-05-24 15:56 by 1uy1ht2y9r
[基金申请] 西安交大新媒学院副院长用撤稿论文结题 +3 bjvtcliu 2026-05-24 5/250 2026-05-24 10:16 by kudofaye
[教师之家] 论文撤稿了 +3 bjvtcliu 2026-05-24 5/250 2026-05-24 10:06 by Equinoxhua
[教师之家] 某211大学教师把个人教师官方主页改成:我跑了我跑了我跑了!官宣跑路！ +4 zju2000 2026-05-21 5/250 2026-05-24 09:35 by songwz
[考博] 26/27申博自荐 10+4 ZXW0202 2026-05-22 9/450 2026-05-24 08:47 by bjvtcliu
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 hvkbtfonbv 2026-05-23 3/150 2026-05-24 08:01 by 9ps9vgkqva
[基金申请] 揭秘青基评审内幕：几个A才能顺利中标 +3 国自然国社科中 2026-05-23 4/200 2026-05-23 15:37 by 2000zf36392
[基金申请] 青B发送上会通知了吗 +5 chemBioBro 2026-05-22 7/350 2026-05-23 12:35 by zhuifengzhy
[考博] 博士申请 +3 焦晓明 2026-05-21 3/150 2026-05-23 11:26 by mlc840311
[基金申请] 面上本子正文33页，违规吗？会被低分嘛？ +14 1234567wang 2026-05-17 16/800 2026-05-21 17:58 by 脆脆的饼干
[基金申请] 国自然评分 +4 无名者登山 2026-05-20 5/250 2026-05-21 16:35 by swuq
[基金申请] 国自然上会要求 +7 无名者登山 2026-05-18 11/550 2026-05-21 15:50 by draco1987
[基金申请] 提交了我也来说说感想 +9 fummck 2026-05-20 10/500 2026-05-21 14:17 by draco1987
[有机交流] 反应很差，大量原料没有反应 5+3 Mr.Zot 2026-05-19 8/400 2026-05-20 22:19 by Equinoxhua
[考博] 如果工作了想读博，可以边工作边读全日制嘛？ 30+3 铁达火车 2026-05-18 5/250 2026-05-20 09:33 by tfang
[考博] 博士申请 +5 星…… 2026-05-18 6/300 2026-05-18 23:49 by 糊糊涂涂好
[硕博家园] 我在等一个没有答案的答案 +3 Love_MH 2026-05-17 3/150 2026-05-18 02:22 by 竹林孤影
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭