应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白纯化有两条杂带一直去不掉……
51/1返回列表
查看: 2816  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ylz2433

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化有两条杂带一直去不掉…… 已有4人参与

我的蛋白是His标签，大约93kDa，在纯化的时候在目的蛋白下面一直有两条带去不掉，试了很多条件，像加PMSF、Tween-20、不同浓度NaCl、不同缓冲液、不同pH过Ni柱、过完Ni柱后过Q柱、过完Q柱后过Ni柱，都没什么效果。希望大神赐教啊。最上面的带是我的目的蛋白

蛋白纯化有两条杂带一直去不掉……
1.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
努力，加油！
1楼 2014-10-24 17:10:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

myheat

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by ylz2433 at 2014-10-27 10:14:51
我跑native-page的时候只有一条带，所以可以确定杂带不是结合在ni柱上……我用过Qsepharose FF，没什么效果……...

不知道是什么蛋白 ，native一条带的话应该是复合体。或者是分子伴侣。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2014-10-27 10:57:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

lpzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我的也有。。。可能是蛋白讲解吧？楼主纯化后下步实验是啥？若要求不高的话，可以继续往下做
赞一下 回复此楼
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2014-10-24 17:24:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ylz2433

新虫 (小有名气)
加了蛋白酶抑制剂PMSF1mM、0.1mM哦，从一开始纯这个酶各种条件下一直有这两条杂带，，，必须得是纯的蛋白才能往下做呢，，，

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
努力，加油！
3楼2014-10-24 18:16:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

myheat

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果你有在his和蛋白之间加蛋白酶如tev，这样过完第一步ni后用tev_his酶切过夜，第二天再过ni柱，收集流穿或低咪唑组分。。。这样可以试试

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-10-24 21:04:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭