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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 液相色谱出峰情况
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德玛西亚的爱

铁虫 (初入文坛)

[求助] 液相色谱出峰情况 已有3人参与

本人做液相色谱，检测代谢产物含量，一种真菌产物，发酵周期11天，液态发酵，接种培养一天后，检测产物结果显示很大很大，怀疑是不是培养基里面有和我待测产物相似结构物质存在，培养基直接进样（抽滤后），色谱基本不出峰，但是我把培养基萃取后；萃取液为甲醇：乙酸乙酯：甲苯（7:3：1），离心取上清液，甲醇稀释10倍，色谱进样，峰面积很大很大，为什么会这样，求大神解答
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德玛西亚的爱
1楼 2014-12-24 21:14:55
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laoliu2962

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
产物是胞内还是胞外，脂溶性亦或水溶性？
您所说的“培养基”是灭菌前还是灭菌后的啊？比如葡萄糖灭菌前和灭菌后，分子构象大不相同
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2楼2014-12-25 22:50:44
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德玛西亚的爱

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by laoliu2962 at 2014-12-25 22:50:44
产物是胞内还是胞外，脂溶性亦或水溶性？
您所说的“培养基”是灭菌前还是灭菌后的啊？比如葡萄糖灭菌前和灭菌后，分子构象大不相同

真菌毒素，桔霉素，代谢产物在胞外，脂溶性，我用的培养基是PDB，刚好有葡萄糖，灭菌后的培养基
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德玛西亚的爱
3楼2014-12-27 14:42:41
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wadecao

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
4楼2015-01-04 13:05:58
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德玛西亚的爱

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wadecao at 2015-01-04 13:05:58
取相同体积的水，用你的萃取剂萃取，离心取上清液，甲醇稀释10倍，色谱进样，看看有没有峰出现

检测某一物质，检测的波长为254nm，最近直接甲苯进样（萃取液含有甲苯），峰面积可大了，今天用紫外分光光度计扫了下，甲苯在254nm处有吸收峰。以前之所以峰面积很大，可以判断为是甲苯在干扰它，现在准备用哥们你提供的方法进样看看，甲醇稀释10倍，100倍，1000倍，目的是为了消除甲苯的干扰，不知道稀释倍数大了，我的物质在不在检测限里面。
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德玛西亚的爱
5楼2015-01-05 18:21:11
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一个不小心就

金虫 (正式写手)
液相色谱需要摸索的，有的时候觉的是产物峰，其实很可能只是溶剂峰。你把纵坐标范围调小一点，有些小的峰就能看到了
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6楼2015-01-06 11:59:32
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wadecao

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
7楼2015-01-06 16:46:16
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德玛西亚的爱

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wadecao at 2015-01-06 16:46:16
查查你的代谢物有没有其他的吸收峰，或者查查你的萃取剂能不能更换成其他的。最好检测波长与所有用到的试剂峰没有重叠，否则的话你怎么稀释都不会很理想的，最后有可能会影响你对发酵的分析。...

目前先稀释看看情况，不行再改变方法，谢谢你的回复
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德玛西亚的爱
8楼2015-01-07 10:06:05
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wlm0917

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

先排除溶剂峰，进针空白看溶剂峰，其次，减少进样量，加内标
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9楼2015-06-29 18:33:29
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