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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 关于液相色谱条件 出峰很宽 很低
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帅曦小弟

新虫 (小有名气)

[求助] 关于液相色谱条件 出峰很宽 很低 已有1人参与

我做的是嘌呤的色谱分析，查文献的色谱条件是：
柱温：30℃
流速：1
流动相：0.02mol/L甲酸铵  pH=3.6
色谱柱：C18（150*4.6）
进样量：10μL
波长：254
图中最后一个是腺嘌呤  这是标准品的出图  感觉很差  不知道怎么调
希望高手给与指点

关于液相色谱条件 出峰很宽 很低
纯 甲酸铵.JPG
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1楼 2014-05-13 18:05:13
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raulsam1984

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
辣笔v小新: 金币+1, 鼓励应助交流 2014-05-16 06:41:56
楼主，可能是流动相条件不是太合适，应该把pH值调高一点，加一点三乙胺试一下，你的峰前面都分离得很好，所以流动相比例就不用调整了。
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2楼2014-05-14 09:45:16
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帅曦小弟

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by raulsam1984 at 2014-05-14 09:45:16
楼主，可能是流动相条件不是太合适，应该把pH值调高一点，加一点三乙胺试一下，你的峰前面都分离得很好，所以流动相比例就不用调整了。

果断在这里先谢谢您，但我还有几点疑问请教您
1、流动相条件是甲酸铵溶液，pH=3.6，调节酸碱度的话,您认为上调到多大合适呢？
2、出现这种情况与色谱柱有没有关系，因为流动相是纯水相，对柱子要求比较严格，是否存在色谱柱无法很好保留的问题呢
3、您所说的三乙胺应该是显碱性，我是用甲酸将pH调低到3.6的（初始甲酸铵溶液pH4.5左右），那您建议的三乙胺除了调节酸碱度方面发挥作用外，其他方面有帮助吗？
问题有点琐碎，希望得到您的细心解答，事关本人课题大事，再次感谢您的耐心回到
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3楼2014-05-14 16:05:55
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raulsam1984

木虫 (著名写手)
★
辣笔v小新: 金币+1, 鼓励应助交流 2014-05-16 06:42:25
引用回帖:
3楼: Originally posted by 帅曦小弟 at 2014-05-14 16:05:55
果断在这里先谢谢您，但我还有几点疑问请教您
1、流动相条件是甲酸铵溶液，pH=3.6，调节酸碱度的话,您认为上调到多大合适呢？
2、出现这种情况与色谱柱有没有关系，因为流动相是纯水相，对柱子要求比较严格，是否 ...

楼主你好。关于你的问题，我这样回答吧：1、由于不知道你的嘌呤的pKa（电离常数）是多少，但由于嘌呤应该呈碱性，所以觉得你流动相的pH值有点低，你把pH值调到pKa值的±2，应该就可以了，但要注意对前面峰的影响。2、如果你是纯水相的流动相，只能用亲水柱（HILIC），但我比较奇怪，我在网上看过一些文献，分离这些化合物，都会有加有机相的，不过这个主要是起到影响分离效果的问题，看你的分离效果还是可以的，这个就不说了。3、三乙胺在这里的作用，主要是起到抑制化合物解离的作用。祝楼主课题顺利。
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4楼2014-05-14 16:29:54
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帅曦小弟

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by raulsam1984 at 2014-05-14 16:29:54
楼主你好。关于你的问题，我这样回答吧：1、由于不知道你的嘌呤的pKa（电离常数）是多少，但由于嘌呤应该呈碱性，所以觉得你流动相的pH值有点低，你把pH值调到pKa值的±2，应该就可以了，但要注意对前面峰的影响。 ...

恩  谢谢您  不过四种物质的pKa都不一样，这样怎么办呢，另外有的文献中要加入1%的甲醇，我试过，结果基本一样，遇到我这种问题，增加有机相是否能得到改善呢
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5楼2014-05-14 17:42:05
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raulsam1984

木虫 (著名写手)
★
辣笔v小新: 金币+1, 鼓励应助交流 2014-05-16 06:42:39
引用回帖:
5楼: Originally posted by 帅曦小弟 at 2014-05-14 17:42:05
恩  谢谢您  不过四种物质的pKa都不一样，这样怎么办呢，另外有的文献中要加入1%的甲醇，我试过，结果基本一样，遇到我这种问题，增加有机相是否能得到改善呢...

楼主，增加有机相只不过是改变化合物的保留时间或者分离度，对你现在遇到的问题没有太多的帮助。你现在是腺嘌呤峰的峰型不好，就是响应时间过长，化合物解离了，这个主要与流动相的pH值环境有关。你说四种物质的pKa值不一样，能否选择一个折中的呢？或者你可以慢慢改变pH看看效果。而且我细心看了一下你的前三个峰，都存在拖尾的现象，调节一下pH值是有必要的。
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6楼2014-05-15 09:06:01
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st.nova2012

新虫 (小有名气)
你这个挺好的了
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7楼2014-05-16 14:43:36
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