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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » Talon Co2+纯化树脂对His-tagged重组蛋白进行纯化
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13815182786

新虫 (初入文坛)

[求助] Talon Co2+纯化树脂对His-tagged重组蛋白进行纯化 已有2人参与

我用Talon Co2+纯化树脂对His-tagged重组蛋白进行纯化，说明书上用最高15omM 的咪唑进行洗脱，但是结果纯化下来的蛋白量很少，我又用200mM,250mM的洗脱，又洗下来差不多的量，浓度高的咪唑对它会有什么影响吗，我要测定酶活应该选哪个呢，求助！

Talon Co2+纯化树脂对His-tagged重组蛋白进行纯化
20141223151437294.jpg
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1楼 2014-12-23 15:17:32
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
13815182786(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-23 19:12:00
最好把洗脱的蛋白透析一下，或者用脱盐柱换一下buffer，否则对酶活可能会不太好。
祝顺利！
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2楼2014-12-23 15:46:20
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
13815182786(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-12-26 20:32:51
钴柱比镍柱用的咪唑浓度低. 150mM咪唑一般就够用了，你可以加大洗脱用的体积。
大部分情况下咪唑浓度稍微高些在短时间内对于蛋白活性没有太大影响，只要你洗脱完了以后用透析或者离子交换柱换一下缓冲液
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2014-12-24 02:59:21
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13815182786

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lihe131 at 2014-12-23 15:46:20
最好把洗脱的蛋白透析一下，或者用脱盐柱换一下buffer，否则对酶活可能会不太好。
祝顺利！

谢谢，我会试试的
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4楼2014-12-25 14:03:41
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13815182786

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2014-12-24 02:59:21
钴柱比镍柱用的咪唑浓度低. 150mM咪唑一般就够用了，你可以加大洗脱用的体积。
大部分情况下咪唑浓度稍微高些在短时间内对于蛋白活性没有太大影响，只要你洗脱完了以后用透析或者离子交换柱换一下缓冲液

好的，谢谢，顺便问一下，钴柱怎么回收呢，我看说明书上用pH5.0 20mM MES 洗，然后保存在20%乙醇里，这是什么原理，之后怎么回收再利用呢？
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5楼2014-12-25 14:08:49
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
引用回帖:
5楼: Originally posted by 13815182786 at 2014-12-24 18:08:49
好的，谢谢，顺便问一下，钴柱怎么回收呢，我看说明书上用pH5.0 20mM MES 洗，然后保存在20%乙醇里，这是什么原理，之后怎么回收再利用呢？...

pH5.0 MES是为了酸性条件下把咪唑洗下来，  20%乙醇只是为了防止细菌生长
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
6楼2014-12-26 03:49:47
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xissy

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2014-12-26 03:49:47
pH5.0 MES是为了酸性条件下把咪唑洗下来，  20%乙醇只是为了防止细菌生长...

用MES处理钴离子后，只是为了把咪唑洗下来。可是柱子多次使用后，可能上面残留了其他蛋白质，需要用EDTA彻底清洗。请问这个柱子用EDTA处理后，可以重新上钴离子吗？
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7楼2018-09-07 12:08:17
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