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tianqingzn新虫 (初入文坛)
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镍柱纯化蛋白遇到了些问题，蛋白挂不上柱，怎么办？？？？求解 已有1人参与
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| 大肠杆菌重组表达的蛋白，带有his标签（N端和C端各一个），经过超声波破碎取上清，酶活很高，然后用镍柱纯化粗酶液，开始用的结合缓冲液加有咪唑，最后的结果是蛋白没挂柱，因为第一次收的液体酶活很高，最后用洗脱液收的液体没有酶活。后来用不加咪唑的结合缓冲液重新纯化蛋白，结果是挂上少许蛋白，而且最终收的液体测酶活酶活很低，该怎么优化纯化体系？？？？还是因为蛋白的his标签在蛋白里面包裹没有暴漏出来，所以挂不上柱，求解，拜托给位前辈了！！！！ |
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