| 查看: 1613 | 回复: 5 | ||
孤鸿飘渺影新虫 (小有名气)
|
[求助]
求助！小载体连大片段怎么连，求高手指点！
|
| 我一个4.2k的载体连接一个7k的片段，试了好几把都没连上。酶切位点是BspEⅠ和HindⅢ两个酶切位点。请各位高手支点招！多谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有153人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 连接载体一直连不上
已经有4人回复
- 质粒是PCR产物，片段是磷酸化的，易自连，求连接体系中二者的比例，希望高手指点
已经有10人回复
- 求助一个witti-horner反应，做了好久没有做出来，请高手帮忙指点
已经有15人回复
- 载体构建出现读码框移位，不知道什么原因，求高手指点。
已经有7人回复
- 设计引物装载体 求高手
已经有7人回复
- Siesta 安装的问题。。。求高手指点
已经有4人回复
- 求高手指点怎么画XY图，旋风分离器
已经有6人回复
- R-OTS 和醇反应。。求高手指点 亲们，做过类似的没，给个招啊
已经有4人回复
- 求高手指点，戊二醛怎么稀释
已经有3人回复
- 质粒导入大肠杆菌导不进去，求高手指点
已经有16人回复
- X-RD分析~求教高手指点！
已经有8人回复
- 跪求高手指点一下，此句英文投稿要的意思，急急急急急！
已经有21人回复
- MS使用问题,求高手指点
已经有14人回复
- 大肠杆菌感受态转化子总是空载体，请高手指点
已经有55人回复
- 用过pET28a(+)表达载体的高人请指教
已经有31人回复
- 薄层喷雾瓶不好用了，求助高手指点
已经有6人回复
- western blot 求助，请高手指点一下
已经有8人回复
- 【求助/交流】请求高手指点，帮忙解释下TMHMM预测结果
已经有14人回复
- 【求助/交流】pMD-18T载体连接出现了问题，请各位高手指点！！！
已经有17人回复
- 【求助】如何选择缓冲盐，，，求高手详细指点
已经有19人回复
- 【求助】mcm-41的xrd，求高手指点
已经有32人回复
- 【求助/交流】寻高手解答：提取质粒老是降解怎么回事？
已经有12人回复
- 【求助】求高手指点 冰醋酸含量滴定
已经有5人回复
感谢参与，应助指数 +1
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2014-12-16 01:26:04
gangouyang
金虫 (小有名气)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 1143.2
- 红花: 2
- 帖子: 108
- 在线: 24.5小时
- 虫号: 3562332
- 注册: 2014-11-27
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
3楼2014-12-16 14:29:14
孤鸿飘渺影
新虫 (小有名气)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 191.2
- 散金: 50
- 帖子: 131
- 在线: 52.5小时
- 虫号: 2809910
- 注册: 2013-11-18
- 性别: GG
- 专业: 发育生物学
4楼2014-12-16 14:48:19
gangouyang
金虫 (小有名气)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 1143.2
- 红花: 2
- 帖子: 108
- 在线: 24.5小时
- 虫号: 3562332
- 注册: 2014-11-27
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
孤鸿飘渺影: 金币+60, ★★★很有帮助, 多谢您的建议，我已经连上了。是将7k的片段分两部分连上的。 2015-01-29 15:20:07
孤鸿飘渺影: 金币+60, ★★★很有帮助, 多谢您的建议，我已经连上了。是将7k的片段分两部分连上的。 2015-01-29 15:20:07
|
听你说的，初步判断你的情况是：载体没切干净，载体自连。顺便说一句：挑6个clone鉴定，如果没有阳性的话，就重来再切一次载体，最多挑10个。另外，你赏的10金币有点少，如果按照以下分析问题得以解决的话，至少20金币。 解决方案： 1.首先确定你的酶切位点所用的两个酶在载体上是不是靠得太近了，甚至有共用碱基的情况，如果是，请换酶切位点，因为你不可能拿到双切的空载体。如果你非要用这两个酶，办法也是有的，就不赘述了。 2.如果不是1这种情况，那么建议你重新切载体，先用HindIII切，胶回收后，再用BspEⅠ切，再胶回收，请勿做同时双酶切，因为HindIII在buffer2中活性是100%，在其他的buffer中活性不高，BspEⅠ在buffer3活性中是100%，在其他的buffer中活性不高。 3.按照以下说明操作：把载体当插入片段，把插入片段当载体，连接时间加长，建议用NEB的连接酶，效率高一些。 祝你赏我金币，谢谢！ |
5楼2014-12-17 18:16:29
孤鸿飘渺影
新虫 (小有名气)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 191.2
- 散金: 50
- 帖子: 131
- 在线: 52.5小时
- 虫号: 2809910
- 注册: 2013-11-18
- 性别: GG
- 专业: 发育生物学
6楼2014-12-19 18:16:29
