| 查看: 2200 | 回复: 15 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
HSY郡主新虫 (初入文坛)
|
[求助]
目的基因和表达载体连接不上，求指导！！！ 已有3人参与
|
|
|
我的目的基因2.2k，送去公司直接合成的。合成后的目的基因连接在puc57载体上，质粒大小为4.9k，其中目的基因2.2k，puc57载体本身2.7k。以质粒为模板进行pcr，胶回收目的片段，然后双酶切（bamh1和ecor1）目的片段和表达载体pyes2（5.9k），连接，转化。平板顺利长菌了，菌落pcr结果为阳性，提质粒酶切以后，却惊奇的发现两条带的大小约为2.2k和2.7k！！！！质粒竟然是最初的“目的基因+puc57载体”，而不是自己想要的“目的基因+pyes2载体”！！！全是假阳性，没有我想要构建的质粒，why？！！！ 我明明已经切胶回收了，按说不应该污染这么多当时pcr做模板的质粒啊，新手上路，求大家指导！ |
回复此楼» 猜你喜欢
论文终于录用啦！满足毕业条件了
已经有13人回复
-
2025年遐想
已经有5人回复
-
投稿Elsevier的杂志（返修），总是在选择OA和subscription界面被踢皮球
已经有8人回复
-
求个博导看看
已经有18人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于目的基因与载体连接后转化感受态细胞提取质粒的问题。
已经有8人回复
- 目的片段与表达载体怎么都连接不上
已经有16人回复
- 求帮助！基因连接克隆载体后转化大肠杆菌，两天了都没长出菌。。。
已经有10人回复
- 目的基因的表达
已经有10人回复
- 目的片段和载体连接一直不上
已经有24人回复
- exceed10安装不上，求大神指导！！
已经有5人回复
- 目的基因与载体连接问题
已经有8人回复
- 什么方法确定插入目的片段后表达载体的阅读框有无发生变化？
已经有9人回复
- 克隆基因为什么一直连不到载体上
已经有11人回复
- 关于目的基因不同向连接到T载体上的问题
已经有19人回复
- 为什么扩了一个抗性基因，连到载体上，这个基因没有表达呢，跪求各个大牛指导！！！
已经有17人回复
- 目的基因连接表达载体的质粒PCR验证，结果出现2条带
已经有10人回复
- 目的基因表达载体的构建问题~请指教
已经有6人回复
- 表达载体的链接
已经有16人回复
- 构建pBI121表达载体，目的基因与载体连接不上
已经有54人回复
- 目的片段与表达载体的连接
已经有23人回复
- 【求助/交流】目的基因与pPIC9K连接的问题！
已经有9人回复
- 【求助/交流】质粒跟目的基因连接不上怎么办
已经有17人回复
- 【求助/交流】目的片段与载体连接不上
已经有16人回复
- 【求助/交流】目的基因连接表达载体后涂板不长菌
已经有11人回复
- 【求助/交流】连接表达载体PET-28A失败原因
已经有23人回复
wanglei512
金虫 (正式写手)
- 应助: 43 (小学生)
- 金币: 1062.8
- 散金: 803
- 红花: 20
- 帖子: 416
- 在线: 216小时
- 虫号: 807816
- 注册: 2009-07-12
- 性别: GG
- 专业: 畜牧学
9楼2014-12-10 15:51:29
wanglei512
金虫 (正式写手)
- 应助: 43 (小学生)
- 金币: 1062.8
- 散金: 803
- 红花: 20
- 帖子: 416
- 在线: 216小时
- 虫号: 807816
- 注册: 2009-07-12
- 性别: GG
- 专业: 畜牧学
12楼2014-12-11 20:12:32
wanglei512
金虫 (正式写手)
- 应助: 43 (小学生)
- 金币: 1062.8
- 散金: 803
- 红花: 20
- 帖子: 416
- 在线: 216小时
- 虫号: 807816
- 注册: 2009-07-12
- 性别: GG
- 专业: 畜牧学
13楼2014-12-11 20:22:27