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chuiwen

银虫 (著名写手)

[求助] 各位大神:real time PCR曲线求解 已有4人参与

各位大神好,小生最近做一个基因的Real-TimePCR,退火温度为52度和56度均试一次,56度明显不行。52度相对还凑合,但是曲线结果比较调皮:扩增曲线平台期升高之后往下降,熔解曲线目的基因峰值过低,求问诸位大侠这种情况肿么破?(三步PCR,退火温度52度30s)
怎么能让52度时的平台更稳,熔解曲线峰值更高呢?
多谢多谢,感激涕零!
初次尝试,结果不好看,诸位见笑啦

各位大神:real time PCR曲线求解
52度扩增曲线.jpg


各位大神:real time PCR曲线求解-1
52度熔解曲线.jpg


各位大神:real time PCR曲线求解-2
56度扩增曲线.jpg


各位大神:real time PCR曲线求解-3
56度熔解曲线.jpg
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纯正天然

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
chuiwen: 金币+10, 有帮助, 谢谢,引物已经设计过了~但是觉得这对引物还是有可能改善的 2014-12-07 21:18:44
还是重新设计特异性引物吧!基本没什么产物产生啊!
2楼2014-12-07 20:10:21
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yzj926521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
chuiwen: 金币+2, 有帮助 2014-12-08 09:54:15
chuiwen: 金币+10, ★★★很有帮助, 确实是引物太差劲~刚想起来还在这里问问题了,谢谢 2014-12-19 17:48:52
引物不合适,重新设计吧
3楼2014-12-08 08:38:40
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ouzhiying

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
chuiwen: 金币+2 2014-12-08 09:58:26
相对而言,56度可以,平台期较稳定,CT值24-27,但没看到你的阴性对照
4楼2014-12-08 08:59:26
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chuiwen

银虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ouzhiying at 2014-12-08 08:59:26
相对而言,56度可以,平台期较稳定,CT值24-27,但没看到你的阴性对照

都有阴性对照的,前两张图没出结果的是阴性对照~后两张图阴性对照的峰也是群魔乱舞,区分不开~

[ 发自小木虫客户端 ]
...
5楼2014-12-08 09:56:25
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刘芬玲

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
chuiwen: 金币+2, 有帮助 2014-12-08 10:00:25
chuiwen: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-12-19 17:49:43
引物特异性不够吧,峰值不单一啊
6楼2014-12-08 09:56:48
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chuiwen

银虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ouzhiying at 2014-12-08 08:59:26
相对而言,56度可以,平台期较稳定,CT值24-27,但没看到你的阴性对照

56度时, 熔解曲线的峰在低温下出现了一大坨,各种东西~这也可以吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
...
7楼2014-12-08 09:58:02
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chuiwen

银虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 刘芬玲 at 2014-12-08 09:56:48
引物特异性不够吧,峰值不单一啊

我觉得 52度时的Tm峰还可以接受,但是太矮~当然也有可能是求成功心切产生的错觉,哈哈

[ 发自小木虫客户端 ]
...
8楼2014-12-08 10:00:10
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