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chuiwen

银虫 (著名写手)

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[求助] 各位大神：real time PCR曲线求解已有4人参与

各位大神好，小生最近做一个基因的Real-TimePCR，退火温度为52度和56度均试一次，56度明显不行。52度相对还凑合，但是曲线结果比较调皮：扩增曲线平台期升高之后往下降，熔解曲线目的基因峰值过低，求问诸位大侠这种情况肿么破？（三步PCR,退火温度52度30s）
怎么能让52度时的平台更稳，熔解曲线峰值更高呢？
多谢多谢，感激涕零！
初次尝试，结果不好看，诸位见笑啦

52度扩增曲线.jpg

52度熔解曲线.jpg

56度扩增曲线.jpg

56度熔解曲线.jpg

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1楼 2014-12-06 21:45:29

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纯正天然

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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chuiwen: 金币+10, ★有帮助, 谢谢，引物已经设计过了～但是觉得这对引物还是有可能改善的 2014-12-07 21:18:44

还是重新设计特异性引物吧！基本没什么产物产生啊！

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2楼2014-12-07 20:10:21

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yzj926521

新虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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chuiwen: 金币+2, ★有帮助 2014-12-08 09:54:15
chuiwen: 金币+10, ★★★很有帮助, 确实是引物太差劲～刚想起来还在这里问问题了，谢谢 2014-12-19 17:48:52

引物不合适，重新设计吧

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3楼2014-12-08 08:38:40

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