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孤の魔灵

银虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE出了问题,我是新手,求助!!!

我的SDS-PAGE电泳以前一直用的是浓度为12%的分离胶,但是不知怎么,突然marker整体下移,跑出9%浓度的效果,现在用的是13.5%的浓度的分离胶,虽然可以用,但是还是没有以前12%的分离胶效果好,已经试过好多办法,各种试剂都换了一遍,都没用,试剂也没过期,求各位大神帮帮忙咯!!!!
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孤の魔灵

银虫 (小有名气)

乖乖。。。得看到什么时候
2楼2014-12-03 19:01:06
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秋雨晗晨

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我一直用12%的胶,感觉挺好的呃,你所说的Mark整体下移,是连内参都跟mark对应不上吗,比如tubulin、actin和GAPDH,你用着几个内参看看是不是mark错位降解了,还有一种可能,就是胶没有夹紧,缓冲液一直在漏,这种情况也会导致跑的不齐,最好是有图
3楼2014-12-15 12:28:42
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嘿小杨同志

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
孤の魔灵: 金币+5, 博学EPI+1, 有帮助 2015-05-16 10:07:22
换成低电压100v这样 跑时间长点,跑胶的时候可以放在冰盒上,避免温度过高。 还有marker是线性的,楼主处理样品的时候要加sds和2-ME,有些时候是蛋白样品没有处理好。
4楼2014-12-18 21:37:58
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aza加油nn

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是否观察过温度,温度过高会使胶孔径变大从而使跑胶比平时温度下快一点,且条带会下移!温度过低会使胶孔径变小,跑胶较慢!

[ 发自小木虫客户端 ]
你尽力了,才有资格说自己的运气不好。
5楼2014-12-23 20:04:44
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孤の魔灵

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 秋雨晗晨 at 2014-12-15 12:28:42
我一直用12%的胶,感觉挺好的呃,你所说的Mark整体下移,是连内参都跟mark对应不上吗,比如tubulin、actin和GAPDH,你用着几个内参看看是不是mark错位降解了,还有一种可能,就是胶没有夹紧,缓冲液一直在漏,这种情 ...

条带都很对应,marker和样品都下移了
6楼2015-02-03 11:03:47
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孤の魔灵

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by aza加油nn at 2014-12-23 20:04:44
是否观察过温度,温度过高会使胶孔径变大从而使跑胶比平时温度下快一点,且条带会下移!温度过低会使胶孔径变小,跑胶较慢!

一直都是在20℃的条件下跑胶,就是冬天也是在空调房里,制胶,跑胶,也没出什么问题,结果有一天突然就这养了,毫无头绪
7楼2015-02-03 11:40:53
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孤の魔灵

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by aza加油nn at 2014-12-23 20:04:44
是否观察过温度,温度过高会使胶孔径变大从而使跑胶比平时温度下快一点,且条带会下移!温度过低会使胶孔径变小,跑胶较慢!

可是一直都是20℃的条件跑胶的,以前也没出啥问题
8楼2015-02-04 14:02:51
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