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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 网络生活区 » 有奖问答 » 学术帮助 » SDS-PAGE出了问题，我是新手，求助！！！
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孤の魔灵

银虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE出了问题，我是新手，求助！！！

我的SDS-PAGE电泳以前一直用的是浓度为12%的分离胶，但是不知怎么，突然marker整体下移，跑出9%浓度的效果，现在用的是13.5%的浓度的分离胶，虽然可以用，但是还是没有以前12%的分离胶效果好，已经试过好多办法，各种试剂都换了一遍，都没用，试剂也没过期，求各位大神帮帮忙咯！！！！
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1楼 2014-12-02 21:04:48
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回帖置顶 ( 共有1个 )

嘿小杨同志

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
孤の魔灵: 金币+5, 博学EPI+1, ★有帮助 2015-05-16 10:07:22
换成低电压100v这样 跑时间长点，跑胶的时候可以放在冰盒上，避免温度过高。 还有marker是线性的，楼主处理样品的时候要加sds和2-ME，有些时候是蛋白样品没有处理好。
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4楼2014-12-18 21:37:58
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孤の魔灵

银虫 (小有名气)
乖乖。。。得看到什么时候
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2楼2014-12-03 19:01:06
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秋雨晗晨

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我一直用12%的胶，感觉挺好的呃，你所说的Mark整体下移，是连内参都跟mark对应不上吗，比如tubulin、actin和GAPDH，你用着几个内参看看是不是mark错位降解了，还有一种可能，就是胶没有夹紧，缓冲液一直在漏，这种情况也会导致跑的不齐，最好是有图
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3楼2014-12-15 12:28:42
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aza加油nn

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是否观察过温度，温度过高会使胶孔径变大从而使跑胶比平时温度下快一点，且条带会下移！温度过低会使胶孔径变小，跑胶较慢！

[ 发自小木虫客户端 ]
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你尽力了，才有资格说自己的运气不好。
5楼2014-12-23 20:04:44
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孤の魔灵

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 秋雨晗晨 at 2014-12-15 12:28:42
我一直用12%的胶，感觉挺好的呃，你所说的Mark整体下移，是连内参都跟mark对应不上吗，比如tubulin、actin和GAPDH，你用着几个内参看看是不是mark错位降解了，还有一种可能，就是胶没有夹紧，缓冲液一直在漏，这种情 ...

条带都很对应，marker和样品都下移了
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6楼2015-02-03 11:03:47
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孤の魔灵

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by aza加油nn at 2014-12-23 20:04:44
是否观察过温度，温度过高会使胶孔径变大从而使跑胶比平时温度下快一点，且条带会下移！温度过低会使胶孔径变小，跑胶较慢！

一直都是在20℃的条件下跑胶，就是冬天也是在空调房里，制胶，跑胶，也没出什么问题，结果有一天突然就这养了，毫无头绪
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7楼2015-02-03 11:40:53
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孤の魔灵

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by aza加油nn at 2014-12-23 20:04:44
是否观察过温度，温度过高会使胶孔径变大从而使跑胶比平时温度下快一点，且条带会下移！温度过低会使胶孔径变小，跑胶较慢！

可是一直都是20℃的条件跑胶的，以前也没出啥问题
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8楼2015-02-04 14:02:51
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