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xuanyuanhu

木虫 (著名写手)

[求助] pGEX-4T-1载体 已有1人参与

pGEX-4T-1表达载体,在大肠杆菌中的表达效果如何?对于大蛋白(>100kDa)呢?膜蛋白呢?急求,。。
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biohazard_12

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

pGEX4T-1是常见的原核表达载体,在大肠杆菌中能用IPTG诱导表达出带有GST tag的融合蛋白,用亲和层析纯化可以得到纯度很高的目的蛋白。一般来说,由于启动子不同,pGEX系列载体在大肠杆菌中的表达量不如pET系列载体的高,但是由于作为tag的GST具有不错的维持蛋白稳定及增加溶解度的能力,因此表达出的可溶性蛋白(即折叠结构正确的蛋白)也不一定就比pET系列少。对于大分子量蛋白来说,鉴于上述GST优点,可以尝试纯化一下,但大蛋白本来折叠正确的难度就大,tag的优化作用很有限,最终能否纯化出来还是要看蛋白自身的属性。至于你说的膜蛋白嘛,呃,只能说载体已经不怎么重要了,因为普遍很难纯化,选什么载体要看你的后续纯化路线。
2楼2015-01-21 01:25:44
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