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xuanyuanhu木虫 (著名写手)
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[求助]
pGEX-4T-1载体 已有1人参与
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| pGEX-4T-1表达载体，在大肠杆菌中的表达效果如何？对于大蛋白（>100kDa）呢？膜蛋白呢？急求，。。 |
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【答案】应助回帖
| pGEX4T-1是常见的原核表达载体，在大肠杆菌中能用IPTG诱导表达出带有GST tag的融合蛋白，用亲和层析纯化可以得到纯度很高的目的蛋白。一般来说，由于启动子不同，pGEX系列载体在大肠杆菌中的表达量不如pET系列载体的高，但是由于作为tag的GST具有不错的维持蛋白稳定及增加溶解度的能力，因此表达出的可溶性蛋白（即折叠结构正确的蛋白）也不一定就比pET系列少。对于大分子量蛋白来说，鉴于上述GST优点，可以尝试纯化一下，但大蛋白本来折叠正确的难度就大，tag的优化作用很有限，最终能否纯化出来还是要看蛋白自身的属性。至于你说的膜蛋白嘛，呃，只能说载体已经不怎么重要了，因为普遍很难纯化，选什么载体要看你的后续纯化路线。 |
2楼2015-01-21 01:25:44
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