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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 毕赤酵母重组子鉴定，P不出来
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狮子山下君

木虫 (正式写手)

[交流] 毕赤酵母重组子鉴定，P不出来

电转之后，在高抗性的1000博来霉素的板子上筛选，长了。但是扩PCR的时候，转空载的可以扩初590bp的大小带，但是我电转的质粒却什么带都没有，在高抗性的板子上能长出来，不能确定就电转进去了吗？用PCR鉴定准确吗？我用的是X-33菌株，载体是PPICZaAz，希望有人能帮忙解惑！！
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1楼 2014-11-04 17:00:02
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ginnyzhuzhu

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-07 16:47:25
我也是卡在这一步，我的质粒也是pPICZaA，表达菌株是毕赤酵母GS115。用AOX做菌液pcr，有两条带，一个2000左右，一个500左右。但是提取质粒做pcr，都是在500bp有条带。。。不知道怎么搞，你解决了吗？
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2楼2015-01-06 14:54:29
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ginnyzhuzhu

新虫 (初入文坛)
我查文献说，电转，挑菌概率是40:1.不知道是否要海量筛选呢
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3楼2015-01-06 14:55:58
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wyfdgg

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问您的问题解决了吗  我也遇到类似的问题    提取基因组PCR验证吗 结果只有二十分之一左右的含有目的条带
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4楼2015-10-28 09:39:05
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狮子山下君

木虫 (正式写手)
解决了，后来电转的百分之九十以上的都是转进入的！提高你线性化质粒浓度，线性化后最好跑胶和原环状质粒比一下，你切完全了没有！还有就是电压之类的

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5楼2015-10-28 13:25:54
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asdqwer1234

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好，我最近也遇到了同样的问题，可以交流一下吗

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6楼2018-11-14 21:07:56
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