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狮子山下君

木虫 (正式写手)

[交流] 毕赤酵母重组子鉴定,P不出来

电转之后,在高抗性的1000博来霉素的板子上筛选,长了。但是扩PCR的时候,转空载的可以扩初590bp的大小带,但是我电转的质粒却什么带都没有,在高抗性的板子上能长出来,不能确定就电转进去了吗?用PCR鉴定准确吗?我用的是X-33菌株,载体是PPICZaAz,希望有人能帮忙解惑!!
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ginnyzhuzhu

新虫 (初入文坛)

我查文献说,电转,挑菌概率是40:1.不知道是否要海量筛选呢
3楼2015-01-06 14:55:58
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ginnyzhuzhu

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-07 16:47:25
我也是卡在这一步,我的质粒也是pPICZaA,表达菌株是毕赤酵母GS115。用AOX做菌液pcr,有两条带,一个2000左右,一个500左右。但是提取质粒做pcr,都是在500bp有条带。。。不知道怎么搞,你解决了吗?
2楼2015-01-06 14:54:29
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wyfdgg

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问您的问题解决了吗  我也遇到类似的问题    提取基因组PCR验证吗 结果只有二十分之一左右的含有目的条带
4楼2015-10-28 09:39:05
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狮子山下君

木虫 (正式写手)

解决了,后来电转的百分之九十以上的都是转进入的!提高你线性化质粒浓度,线性化后最好跑胶和原环状质粒比一下,你切完全了没有!还有就是电压之类的

发自小木虫Android客户端
5楼2015-10-28 13:25:54
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