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luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

[求助] MRC-5细胞培养出现问题,求助 已有7人参与

九月份从中科院上海细胞库新买的MRC-5细胞,买回来的细胞活性很好,传代后生长速度也很快,后面用90%的血清和10%的DMSO冻存了,最近复苏冻存的细胞,先是复苏到12.5cm2的小培养瓶中,细胞状态很好,铺满整个瓶底,然后再消化转移到25cm2的培养瓶中,就出现了图片中的问题,已经重复过两次,情况都一样,这是为什么呢?

MRC-5细胞培养出现问题,求助
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MRC-5细胞培养出现问题,求助-1
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MRC-5细胞培养出现问题,求助-2
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CAPFHX

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by luo_jiaojiao at 2014-10-23 13:59:33
很急呀,为虾米木有人回复,不要让我的帖子沉下去了呀

我刚买来,昨天才换液。不过之前我养过HLF,都死了  刚开始状态不好 细胞感觉很瘦弱,而且时不时的就出现污染。我怀疑是支原体污染过,一直潜伏在细胞里,条件一旦合适就出现污染情况了
3楼2014-11-20 09:02:19
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fireme33

至尊木虫 (知名作家)

搬砖娃娃

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
luo_jiaojiao: 金币+5, 有帮助 2014-11-24 16:38:45
您好。。我是苏州大学药学院这边的
在上海细胞库我也买过MRC-5
发现
1 上海细胞没有美国ACTT细胞库好
2 这个细胞拿回来前三代长得非常快,后面就不行了。。大概要1星期
3 最好用DMEM养,MEM我试过效果很不好酸碱度不对
4 建议你用小培养皿养,这个细胞要是传的太稀,基本长不起来,过2星期直接全部死完
祝你成功
哭着哭着就笑了
8楼2014-11-23 21:12:07
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普通回帖

luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

很急呀,为虾米木有人回复,不要让我的帖子沉下去了呀
2楼2014-10-23 13:59:33
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gikyo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

培养基有没有添加谷氨酰胺,没有的话试一试
4楼2014-11-20 11:51:23
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sandancy123

捐助贵宾 (初入文坛)

【答案】应助回帖

冻存细胞的冻存液是90%细胞生长培养基(基础培养基+10%血清)和10%DMSO,你的培养基可能偏酸,还有换换血清试试看
5楼2014-11-20 13:30:31
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luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gikyo at 2014-11-20 11:51:23
培养基有没有添加谷氨酰胺,没有的话试一试

买的MEM里面本身就含有L-谷氨酰胺呢
6楼2014-11-20 17:01:28
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luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by sandancy123 at 2014-11-20 13:30:31
冻存细胞的冻存液是90%细胞生长培养基(基础培养基+10%血清)和10%DMSO,你的培养基可能偏酸,还有换换血清试试看

我们这边一般是用两种方法配制冻存液,一种是70%基础培养基+20%血清+10% DMSO,另一种是90%血清+10% DMSO,师兄说后者效果会好些,所以我都是按后面的方法冻存的。如果是冻存液有问题的话,复苏到比较小的瓶子的时候就应该出现问题啊,我的情况是复苏时形态和密度都没问题,把长满后的细胞转移到大一些的瓶子就出现了这个问题。
7楼2014-11-20 17:06:35
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luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by fireme33 at 2014-11-23 21:12:07
您好。。我是苏州大学药学院这边的
在上海细胞库我也买过MRC-5
发现
1 上海细胞没有美国ACTT细胞库好
2 这个细胞拿回来前三代长得非常快,后面就不行了。。大概要1星期
3 最好用DMEM养,MEM我试过效果很不好酸 ...

对呀对呀,情况真的一样哎,刚买回来特别满,一传二后第二天就长满了,后面就变慢了,我以为是代数多了的原因就没在意,那你冻存后有出现过类似的情况吗?回头我试试DMEM养……
9楼2014-11-24 16:32:11
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fireme33

至尊木虫 (知名作家)

搬砖娃娃

引用回帖:
9楼: Originally posted by luo_jiaojiao at 2014-11-24 16:32:11
对呀对呀,情况真的一样哎,刚买回来特别满,一传二后第二天就长满了,后面就变慢了,我以为是代数多了的原因就没在意,那你冻存后有出现过类似的情况吗?回头我试试DMEM养……...

你是做肺纤维化方向么。。。方便留个QQ么
哭着哭着就笑了
10楼2014-11-24 18:53:34
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