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luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

[求助] MRC-5细胞培养出现问题,求助已有7人参与

九月份从中科院上海细胞库新买的MRC-5细胞,买回来的细胞活性很好,传代后生长速度也很快,后面用90%的血清和10%的DMSO冻存了,最近复苏冻存的细胞,先是复苏到12.5cm2的小培养瓶中,细胞状态很好,铺满整个瓶底,然后再消化转移到25cm2的培养瓶中,就出现了图片中的问题,已经重复过两次,情况都一样,这是为什么呢?

MRC-5细胞培养出现问题,求助
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MRC-5细胞培养出现问题,求助-1
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luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

很急呀,为虾米木有人回复,不要让我的帖子沉下去了呀
2楼2014-10-23 13:59:33
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luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gikyo at 2014-11-20 11:51:23
培养基有没有添加谷氨酰胺,没有的话试一试

买的MEM里面本身就含有L-谷氨酰胺呢
6楼2014-11-20 17:01:28
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luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by sandancy123 at 2014-11-20 13:30:31
冻存细胞的冻存液是90%细胞生长培养基(基础培养基+10%血清)和10%DMSO,你的培养基可能偏酸,还有换换血清试试看

我们这边一般是用两种方法配制冻存液,一种是70%基础培养基+20%血清+10% DMSO,另一种是90%血清+10% DMSO,师兄说后者效果会好些,所以我都是按后面的方法冻存的。如果是冻存液有问题的话,复苏到比较小的瓶子的时候就应该出现问题啊,我的情况是复苏时形态和密度都没问题,把长满后的细胞转移到大一些的瓶子就出现了这个问题。
7楼2014-11-20 17:06:35
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luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by fireme33 at 2014-11-23 21:12:07
您好。。我是苏州大学药学院这边的
在上海细胞库我也买过MRC-5
发现
1 上海细胞没有美国ACTT细胞库好
2 这个细胞拿回来前三代长得非常快,后面就不行了。。大概要1星期
3 最好用DMEM养,MEM我试过效果很不好酸 ...

对呀对呀,情况真的一样哎,刚买回来特别满,一传二后第二天就长满了,后面就变慢了,我以为是代数多了的原因就没在意,那你冻存后有出现过类似的情况吗?回头我试试DMEM养……
9楼2014-11-24 16:32:11
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luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

这是上次冻存的那批MRC-5复苏后的效果,感觉状态没什么为题,但是鉴于之前几次传代后就畸形化的经历,不太敢轻易处理了,求大神支招。

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11楼2014-12-15 21:22:16
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luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by luo_jiaojiao at 2014-12-15 21:22:16
这是上次冻存的那批MRC-5复苏后的效果,感觉状态没什么为题,但是鉴于之前几次传代后就畸形化的经历,不太敢轻易处理了,求大神支招。

哦,这个是图。
MRC-5细胞培养出现问题,求助-3
IMG_0116.JPG


MRC-5细胞培养出现问题,求助-4
IMG_0119.JPG

12楼2014-12-15 21:28:06
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luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by CAPFHX at 2015-01-17 13:24:54
我是从暑假7月份就开始养细胞了  半年多了 我买过三株细胞  每次都是传代四五次就出问题  刚开始还以为是我操作技术不过关 让细胞收到潜伏的污染  一直在找原因  各种找条件找原因   不知为这细胞哭了多少次
  直到 ...

好吧,大家都这样说,养细胞的苦,哎,人艰不拆呀!
18楼2015-01-17 14:11:27
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luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

引用回帖:
19楼: Originally posted by CAPFHX at 2015-01-17 16:08:01
你还在用MRC-5做实验吗? 你有想法买国外ATCC公司的吗? 咱们可以一起买  这样就便宜了...

暂时不打算买了,呵呵
20楼2015-01-18 13:14:52
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