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沐小白

新虫 (初入文坛)

[求助] 急!关于细胞试验的几个疑问? 已有3人参与

刚刚接触细胞试验,有几个疑问麻烦各位有经验的前辈指教:
1.一般试验细胞的最佳时期为对数生长期,在做MTT试验时,选取处于对数生长期的细胞计数后以一定细胞密度接种铺板,一般是经过24小时的培养后做给药处理,我的疑问是:已经经过一天培养的细胞是否还是处于最佳试验周期的细胞呢?这时候细胞的数量较接种之前的技术也发生了变化,这对我测定细胞存活率等是否会有影响?
2.目前在做的是HepG2的一个试验,在铺板后96孔板中各孔观察到的细胞形态多为圆形,与在培养皿和瓶中生长时的梭形细胞有所不同,且视野内观察到的细胞非常少(接种的计数密度为10000个/孔),这些情况是否正常?
很是着急~~~本人新手,金币不多,恳请各位前辈指导一下,真心谢过~~~~
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yipan

铜虫 (职业作家)


【答案】应助回帖

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圆形说明没有贴壁,梭型的贴壁了。再养一养吧。
2楼2014-06-26 13:20:53
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沐小白

新虫 (初入文坛)

顶一下~~~
3楼2014-06-26 20:16:04
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环境增值联盟

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
2014化学生物学与一氧化氮(NO)国际会议      大会官网:http://broadway.sjtu.edu.cn,2014年7月4-6日,上海。议题:化学生物学、NO、组学(NO仅为议题中的三分之一)。诺贝尔医学奖获得者Ferid Murad教授担任大会名誉主席,科技部原副部长程津培院士担任大会主席。
4楼2014-06-27 10:55:27
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我听五月天

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
沐小白: 金币+5, 有帮助 2014-07-18 09:38:33
1.最好不要让瓶子里长满了的细胞再挤一天,不用的话及时传代或者冻存。挤了一天肯定影响了状态,不过要求不是那么严格或者实验的目的不要求精确数据的话可以用。
2.这个肝癌细胞应该比较好养,同学用小牛血清都可以养,应该不是圆形,圆形说明状态不对,实验应该不能用了。10000/孔可以做24-48小时的,不过如果要做72小时或>72小时的估计这个数量有点儿大。
为爱而生
5楼2014-06-27 15:18:08
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沐小白

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 我听五月天 at 2014-06-27 15:18:08
1.最好不要让瓶子里长满了的细胞再挤一天,不用的话及时传代或者冻存。挤了一天肯定影响了状态,不过要求不是那么严格或者实验的目的不要求精确数据的话可以用。
2.这个肝癌细胞应该比较好养,同学用小牛血清都可以 ...

前辈的意思是不是铺板的细胞密度随观察点的不同要有变化,这样的话是不是每次铺板前都要计数呢?
6楼2014-07-07 09:05:34
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我听五月天

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 沐小白 at 2014-07-07 09:05:34
前辈的意思是不是铺板的细胞密度随观察点的不同要有变化,这样的话是不是每次铺板前都要计数呢?...

如果可以最好每次计数。其实只要每次铺板子只要计数一次就好,得到密度后经过计算就知道怎样稀释能得到自己想要的最终密度了。
为爱而生
7楼2014-07-09 18:04:16
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