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fuyuandj86

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[求助] 求助qPCR标准曲线法已有1人参与

刚接触qPCR,还不太了解具体的概念
请问qPCR标准曲线法获得标准曲线就是为了估算引物的效率吗？
如果仅仅是为了估算引物效率，我的数据点不在标准曲线中间可以不可以？
用于做标准曲线的样品需要独立重复三次吗？也就是说我要提取三次RNA?

如果我有DNA质粒，可以不可以用DNA做标准曲线？

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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.

1楼 2014-10-06 07:17:27

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416114799

至尊木虫 (知名作家)

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【答案】应助回帖

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fuyuandj86(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-11-12 20:32:23
fuyuandj86: 金币+17 2014-11-12 23:13:55

① 标曲有两个用处：用于估计效率；并且用于计算你扩增出来的东西的copy；
② 最好是你的样品出来的Ct值都落在标曲的中间，保证准确性，不过如果标曲的线性非常好，我觉得也未必；
③ 一般是做3-4个平行试验，你可以分别提RNA，然后把三个样品混在一起，再取三份跑qPCR；如果为了节约成本，你也可以尽量保证操作没有问题，你可以样品线混匀，再一次性提RNA，最后分成3份跑qPCR。