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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】关于内标法的做标准曲线
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xiaoruan

木虫 (职业作家)

[求助] 【求助】关于内标法的做标准曲线

刚接触色谱这块，对内标法不是太了解，想请教一下论坛的朋友们关于内标法做标准曲线时，纵坐标和横坐标分别为什么?我看到关于纵坐标一般都是响应值之比，横坐标有些说是待测浓度，有些说待测浓度和内标的比值，请问大家这两种哪一种是正确的？谢谢！
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1楼2011-11-09 12:21:19
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slg102

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

xiaoruan(金币+5): 2011-11-09 22:09:06
其实，不管怎样能算出浓度就行，所以横坐标是浓度最合适
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2楼2011-11-09 13:29:46
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金子225

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

xiaoruan(金币+5): 2011-11-09 22:09:36
横坐标是被测物质和内标物的浓度比，纵坐标是被测物质和内标物的面积比
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3楼2011-11-09 15:25:52
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njkinghu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

xiaoruan(金币+2): 2011-11-09 22:13:26
1    前言
内标法是经典的色谱定量方法，在配制分析样品时要求加入一个或数个内标物组份，内标物必须是分析样品中不含有的组份，而且要求与样品中的其它组份有良好的分离[1，2]。由于受分离因素制约，很多情况下给内标物的选择带来不便，有时甚至无法选到合适的内标物。鉴于这种情况，我们尝试将内标法与叠加法相结合成为一种新的定量方法，称为叠加内标法，用于没有合适内标物的场合。

2  叠加内标法定量原理
已知某样品中含有k，i，x三个组份(可以有更多的组份，x1，x2，x3......)，命名k组份为峰面积校正组份，i组分为叠加内标组份，x组分为任意组份，样品经色谱分离后得到三个组份的峰面积分别为Ak，Ai，Ax，上述三个组份相对于i组份的校正因子分别为Fki、1.000和Fxi，样品中三个组份的含量分别为Ck、Ci和Cx。现分别准确称取m克样品和Ws克i组份，然后将二者混合，混合物称为加标样品。加标样品经色谱分离后得到三个组份的峰面积分别是：k组份峰面积为A1，i组份峰面积为A2（A2是样品中原有的i组份和加入的叠加i组份共同构成的峰面积）。x组份或其它组份峰面积与计算无关。求样品中各组份百分含量的步骤如下：

2．1  利用k组份进行峰面积校正
令k组份加标后与加标前的峰面积的比值为K（k组份加标后与加标前的峰面积在理论上是相同的，此处引入校正系数K的目的是为了消除进样量误差），则K的表达式为：
K = A1/Ak                                          （1）
    再利用K对加标前的k，i，组份的峰面积进行修正如下：
A = K×Ak                                          （2）
B = K×Ai                                          （3）
式（2）、式（3）中的K为加标后与加标前的两次进样的峰面积校正系数，虽然K是从组份k得到的，但亦适合其它组份。A和B分别为Ak和Ai的校正值。

2．2  引入叠加法
引入叠代法的计算公式[1]：
            W=Ws×A0/(Ah-A0)                                    (4)
在式（4）中，W 表示样品中原有内标物组份的重量；Ws表示加入的那部分内标物组份的重量；A0表示样品中原有内标物组份的峰面积；Ah 表示加标后内标物组份总的峰面积。
    在本文中，A2相当于Ah，B相当于A0，W与Ws含义不变，因此有：
W = B×Ws/(A2-B)                                    （5）
将式（1）及式（3）代入式（5）可得式（6）
W = (A1/Ak)×Ai×Ws/[A2-(A1/Ak)×Ai]                   （6）
式（6）又可写成：
W = A1×Ai×Ws/(Ak×A2-A1×Ai)                       （7）

2．3  引入内标法
引入内标法计算公式[1]：
                Cx=(Ax/As) ×Fxs×100×W/m                            (8)
式（8）中，Cx为样品中x组份的含量；W为样品中原有内标物组份s的重量；m为样品的重量；Fxs为被测组份x相对于内标物组份s的校正因子；Ax 、As分别为组份x和内标物组份s的峰面积。
在本文中，叠加内标组份i相当于式（8）中的内标物组份s，其它各项意义相同，因此可导出叠加内标法定量计算公式：
                Cx = （Ax/ Ai）×Fxi×100×W /m                       （9）

2．4    综合结论
综合2及3中的结论式（7）和式（9）可得叠加内标法定量计算公式：
Cx = Ax×Fxi×100×A1×Ws/[（Ak×A2-Ai×A1）×m]      （10）

3   叠加内标法与叠加法和内标法的比较

3．1  优点
与内标法比较：
（1）叠加内标法的内标物可以是被测样品中已有的组分，因此，不必考内标物的分离问题，可以选择样品中分离良好的任一组分为内标物；
（2）用于没有合适内标物的场合。
（3）对进样量准确性要求不严格。
与叠加法的比较：在叠加法中，一次加入只能测定一个组份，在对多组份样品进行测定时需要多次加入和多次进样；而叠加内标法只需要一次加入和两次进样即可以同时测定多个组份。

3．2  缺点
与内标法比较：需两次进样，即分别测量一次样品和加标样品。
与叠加法比较：在测定内标物以外的组份时需要知道该组分的校正因子
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4楼2011-11-09 18:52:35
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xiaoruan

木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 金子225 at 2011-11-09 15:25:52:
横坐标是被测物质和内标物的浓度比，纵坐标是被测物质和内标物的面积比

做标准曲线时，先配置待测样品的标样的梯度浓度的溶液，然后分别加入等量的内标物，测出其响应值，既然加入的内标物都是一样的，那样横坐标可否为待测物的浓度？
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5楼2011-11-09 22:12:53
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xiaoruan

木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by njkinghu at 2011-11-09 18:52:35:
1    前言
内标法是经典的色谱定量方法，在配制分析样品时要求加入一个或数个内标物组份，内标物必须是分析样品中不含有的组份，而且要求与样品中的其它组份有良好的分离[1，2]。由于受分离因素制约，很多情况下 ...

这个内标叠加法太对于我来说太深奥了，我现在就想知道内标法的标准曲线，楼主是否可以指点一下，谢谢！
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6楼2011-11-09 22:14:20
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jinglh8288

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

xiaoruan(金币+2): 2011-11-10 19:28:59
引用回帖:
5楼: Originally posted by xiaoruan at 2011-11-09 22:12:53:
做标准曲线时，先配置待测样品的标样的梯度浓度的溶液，然后分别加入等量的内标物，测出其响应值，既然加入的内标物都是一样的，那样横坐标可否为待测物的浓度？

应该是浓度比和响应值之比，否则家内标还有什么意义呢，直接用标样定量不就可以了么？内标抵消了一些实验误差……
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一分耕耘，一分收获。
7楼2011-11-10 08:56:26
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zhangxuan200

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

xiaoruan(金币+2): 2011-11-10 19:28:47
纵坐标都是待测物与内标的响应比值，横坐标则与你的试验方法有关，如果试验过程中只用一种浓度的内标，可以采用待测物浓度为横坐标，如果加入的内标浓度不同时，需用校正的标准曲线，即横坐标为待测物浓度与内标浓度的比值。
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8楼2011-11-10 09:27:27
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金子225

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by xiaoruan at 2011-11-09 22:14:20:
这个内标叠加法太对于我来说太深奥了，我现在就想知道内标法的标准曲线，楼主是否可以指点一下，谢谢！

可以这么说，前提条件是之后配的样加入的内标量要和制作标准曲线时候的一样。但是如果标准曲线做的是浓度比，之后在配制要测量的样品时可以按需添加内标物，不需要一样
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9楼2011-11-10 09:34:21
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金子225

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 金子225 at 2011-11-10 09:34:21:
可以这么说，前提条件是之后配的样加入的内标量要和制作标准曲线时候的一样。但是如果标准曲线做的是浓度比，之后在配制要测量的样品时可以按需添加内标物，不需要一样

晕，还引用错了，不好意思
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10楼2011-11-10 09:35:30
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