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louisa俊

银虫 (小有名气)

应助: 6 (幼儿园)
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虫号: 1343485
注册: 2011-07-12
性别: MM
专业: 微生物药物

[求助] 判断引物是否适合用于qRT-PCR 已有2人参与

跟别人借了几种引物，当时他说，有的引物可以做实时定量荧光PCR，有的只能做普通PCR。我做了预实验，将所有的引物都进行qRT-PCR了，结果有的CT值在20左右，有的接近30，甚至35。想求助一下，是否CT值接近30了，就说明这引物不适合做qRT-PCR? 不适合做qRT-PCR的引物，如果进行下一步呢？是直接将cDNA用普通的PCR仪器进行扩增，然后再跑琼脂糖凝胶电泳？还是直接将qPT-PCR的产物进行电泳呢？谢谢啦！

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1楼 2014-09-28 15:08:32

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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

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专业: 植物生理与生化

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-09-29 11:22:06

如果有引物序列，直接做下blastn比对，预测下每对引物扩增产物的大小，一般用于荧光定量的引物，产物大小在80-250bp较合适，用于电泳的则大小一般300-500bp较合适。你既然已经做了荧光，那看下每对引物的特异性如何，看熔解曲线是不是单一峰。

2楼2014-09-28 22:40:54

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