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我可以哭泣，可以悲伤，但我不可以不坚强。

1楼2014-09-28 09:31:12

就会提核酸

铜虫 (初入文坛)

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吉部落zy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-04 22:15:29
吉部落zy: 金币+1, ★有帮助 2014-10-16 10:14:12

不是降解，而是杂质残留导致电泳出现这样的情况。

5楼2014-10-01 14:11:39

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chenguestc

木虫 (职业作家)

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-28 18:52:35

可以把您的提取步骤贴上来，这样才好分析是哪里出了问题哈
降解无怪乎几种原因：
1，加入提取液后，若是65度提取，时间太久，有可能造成部分降解。
2，降入氯仿/异戊醇后，剧烈混匀时间太久，造成部分DNA断裂
3，打碎组织时最好用液氮处理后研磨的方式，用珠子打碎在后期混匀过程中也容易造成DNA断裂

2楼2014-09-28 09:50:06

吉部落zy

金虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by chenguestc at 2014-09-28 09:50:06
可以把您的提取步骤贴上来，这样才好分析是哪里出了问题哈
降解无怪乎几种原因：
1，加入提取液后，若是65度提取，时间太久，有可能造成部分降解。
2，降入氯仿/异戊醇后，剧烈混匀时间太久，造成部分DNA断裂
3 ...

1、CTAB溶液预热  2、研磨液氮成粉末（肉质叶不好磨）  3、把粉末转移到含有抽提液的离心管中
4、在65℃加热60min，不时搅动。
5、加等体积氯仿/异戊醇抽提, 混合10min，重复一次  1000转离心5min
6、取上清加入1/2体积、5M NaCl 、加等体积，－20℃预冷的异丙醇－20℃放置1小时
7、4℃ 12000rpm 离心15分钟
8、75％乙醇洗2次  10000rpm 离心3分钟
9、37℃ 烘干  约15钟
10、加150ul ddH2O溶解，用枪抽打直至全溶
15、加3ul RNAase 37℃消化1h分钟. 4度过夜放入-20保存

我可以哭泣，可以悲伤，但我不可以不坚强。

3楼2014-09-28 15:46:26

chenguestc

木虫 (职业作家)

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吉部落zy(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-10-04 22:15:21
吉部落zy: 金币+1, ★有帮助 2014-10-16 10:13:54

枪抽打直至全溶???抽打多长时间？？
做原位杂交时，标记探针可以用枪抽打进行DNA的打断啊。。。。。
为什么不等待DNA自然干燥后，加入水或TE让其自行溶解呢？？
从步骤上看，问题不是很大。
今后建议在加提取液时就加入RNAase ,这样在后面抽提时RNAase 有可被除去，最后加，DNA中则混有RNAase 。
加入氯仿/异戊醇之后的10分钟时如何混匀的啊？？剧烈震荡？斡旋？还是温柔旋转？

4楼2014-09-29 11:16:07