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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 为什么提取植物全基因组DNA总是降解呢？？
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吉部落zy

金虫 (小有名气)

[求助] 为什么提取植物全基因组DNA总是降解呢？？ 已有3人参与

图上是我提取的DNA  我以为是植物放在-20衰老了  （图1）又去外面踩了绿叶回来提取发现还是有点降解（图2靠近marker）是什么原因导致DNA降解呢？
、

为什么提取植物全基因组DNA总是降解呢？？
2014  09 24 .png


为什么提取植物全基因组DNA总是降解呢？？-1
2014-09-27 17 小时 30 分钟.jpg
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我可以哭泣，可以悲伤，但我不可以不坚强。
1楼 2014-09-28 09:31:12
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-28 18:52:35
可以把您的提取步骤贴上来，这样才好分析是哪里出了问题哈
降解无怪乎几种原因：
1，加入提取液后，若是65度提取，时间太久，有可能造成部分降解。
2，降入氯仿/异戊醇后，剧烈混匀时间太久，造成部分DNA断裂
3，打碎组织时最好用液氮处理后研磨的方式，用珠子打碎在后期混匀过程中也容易造成DNA断裂
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2楼2014-09-28 09:50:06
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吉部落zy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2014-09-28 09:50:06
可以把您的提取步骤贴上来，这样才好分析是哪里出了问题哈
降解无怪乎几种原因：
1，加入提取液后，若是65度提取，时间太久，有可能造成部分降解。
2，降入氯仿/异戊醇后，剧烈混匀时间太久，造成部分DNA断裂
3 ...

1、CTAB溶液预热  2、研磨液氮 成粉末（肉质叶不好磨）  3、把粉末转移到含有抽提液的离心管中
4、 在65℃加热60min，不时搅动。
5、 加等体积氯仿/异戊醇抽提, 混合10min，重复一次  1000转离心5min
6、取上清加入1/2体积、5M NaCl 、加等体积，－20℃预冷的异丙醇 －20℃放置1小时
7、4℃ 12000rpm 离心15分钟
8、75％乙醇洗2次  10000rpm 离心3分钟
9、37℃ 烘干  约15钟
10、加150ul ddH2O溶解，用枪抽打直至全溶
15、加3ul RNAase 37℃消化1h分钟. 4度过夜放入-20保存
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我可以哭泣，可以悲伤，但我不可以不坚强。
3楼2014-09-28 15:46:26
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
吉部落zy(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-10-04 22:15:21
吉部落zy: 金币+1, ★有帮助 2014-10-16 10:13:54
枪抽打直至全溶???抽打多长时间？？
做原位杂交时，标记探针可以用枪抽打进行DNA的打断啊。。。。。
为什么不等待DNA自然干燥后，加入水或TE让其自行溶解呢？？
从步骤上看，问题不是很大。
今后建议在加提取液时就加入RNAase ,这样在后面抽提时RNAase 有可被除去，最后加，DNA中则混有RNAase 。
加入氯仿/异戊醇之后的10分钟时如何混匀的啊？？剧烈震荡？斡旋？还是温柔旋转？
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4楼2014-09-29 11:16:07
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就会提核酸

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
吉部落zy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-04 22:15:29
吉部落zy: 金币+1, ★有帮助 2014-10-16 10:14:12
不是降解，而是杂质残留导致电泳出现这样的情况。
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5楼2014-10-01 14:11:39
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564539962

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
吉部落zy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-04 22:15:38
吉部落zy: 金币+1, ★有帮助 2014-10-16 10:14:18
实验操作过程中得戴手套戴口罩操作，一些实验需要的东西也得是无酶的，小心谨慎一些，应该就没问题了
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6楼2014-10-02 20:59:14
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吉部落zy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chenguestc at 2014-09-29 11:16:07
枪抽打直至全溶???抽打多长时间？？
做原位杂交时，标记探针可以用枪抽打进行DNA的打断啊。。。。。
为什么不等待DNA自然干燥后，加入水或TE让其自行溶解呢？？
从步骤上看，问题不是很大。
今后建议在加提取液 ...

抽打一分钟左右 ，那那加入多少RNA酶呢   ，就是EP管放在架子上颠倒混匀
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我可以哭泣，可以悲伤，但我不可以不坚强。
7楼2014-10-09 18:45:02
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吉部落zy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 564539962 at 2014-10-02 20:59:14
实验操作过程中得戴手套戴口罩操作，一些实验需要的东西也得是无酶的，小心谨慎一些，应该就没问题了

这样能用pcr么
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我可以哭泣，可以悲伤，但我不可以不坚强。
8楼2014-10-09 18:45:40
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吉部落zy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 就会提核酸 at 2014-10-01 14:11:39
不是降解，而是杂质残留导致电泳出现这样的情况。

请问这样可以用于pcr么
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我可以哭泣，可以悲伤，但我不可以不坚强。
9楼2014-10-09 18:46:15
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就会提核酸

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
吉部落zy: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-10-10 16:08:18
必须试，而且试最不好看的样品。注意尽可能少用DNA就行。如果不成，再发帖以帮你解决。
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10楼2014-10-09 20:03:48
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