应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 为什么提取植物全基因组DNA总是降解呢？？
121/2返回列表12下一页
查看: 2893  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

吉部落zy

金虫 (小有名气)

[求助] 为什么提取植物全基因组DNA总是降解呢？？ 已有3人参与

图上是我提取的DNA  我以为是植物放在-20衰老了  （图1）又去外面踩了绿叶回来提取发现还是有点降解（图2靠近marker）是什么原因导致DNA降解呢？
、

为什么提取植物全基因组DNA总是降解呢？？
2014  09 24 .png


为什么提取植物全基因组DNA总是降解呢？？-1
2014-09-27 17 小时 30 分钟.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
我可以哭泣，可以悲伤，但我不可以不坚强。
1楼 2014-09-28 09:31:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-28 18:52:35
可以把您的提取步骤贴上来，这样才好分析是哪里出了问题哈
降解无怪乎几种原因：
1，加入提取液后，若是65度提取，时间太久，有可能造成部分降解。
2，降入氯仿/异戊醇后，剧烈混匀时间太久，造成部分DNA断裂
3，打碎组织时最好用液氮处理后研磨的方式，用珠子打碎在后期混匀过程中也容易造成DNA断裂
赞一下 回复此楼
2楼2014-09-28 09:50:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吉部落zy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2014-09-28 09:50:06
可以把您的提取步骤贴上来，这样才好分析是哪里出了问题哈
降解无怪乎几种原因：
1，加入提取液后，若是65度提取，时间太久，有可能造成部分降解。
2，降入氯仿/异戊醇后，剧烈混匀时间太久，造成部分DNA断裂
3 ...

1、CTAB溶液预热  2、研磨液氮 成粉末（肉质叶不好磨）  3、把粉末转移到含有抽提液的离心管中
4、 在65℃加热60min，不时搅动。
5、 加等体积氯仿/异戊醇抽提, 混合10min，重复一次  1000转离心5min
6、取上清加入1/2体积、5M NaCl 、加等体积，－20℃预冷的异丙醇 －20℃放置1小时
7、4℃ 12000rpm 离心15分钟
8、75％乙醇洗2次  10000rpm 离心3分钟
9、37℃ 烘干  约15钟
10、加150ul ddH2O溶解，用枪抽打直至全溶
15、加3ul RNAase 37℃消化1h分钟. 4度过夜放入-20保存
赞一下 回复此楼
我可以哭泣，可以悲伤，但我不可以不坚强。
3楼2014-09-28 15:46:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
吉部落zy(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-10-04 22:15:21
吉部落zy: 金币+1, ★有帮助 2014-10-16 10:13:54
枪抽打直至全溶???抽打多长时间？？
做原位杂交时，标记探针可以用枪抽打进行DNA的打断啊。。。。。
为什么不等待DNA自然干燥后，加入水或TE让其自行溶解呢？？
从步骤上看，问题不是很大。
今后建议在加提取液时就加入RNAase ,这样在后面抽提时RNAase 有可被除去，最后加，DNA中则混有RNAase 。
加入氯仿/异戊醇之后的10分钟时如何混匀的啊？？剧烈震荡？斡旋？还是温柔旋转？
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-29 11:16:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

就会提核酸

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
吉部落zy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-04 22:15:29
吉部落zy: 金币+1, ★有帮助 2014-10-16 10:14:12
不是降解，而是杂质残留导致电泳出现这样的情况。
赞一下 回复此楼
5楼2014-10-01 14:11:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

564539962

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
吉部落zy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-04 22:15:38
吉部落zy: 金币+1, ★有帮助 2014-10-16 10:14:18
实验操作过程中得戴手套戴口罩操作，一些实验需要的东西也得是无酶的，小心谨慎一些，应该就没问题了
赞一下 回复此楼
6楼2014-10-02 20:59:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吉部落zy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chenguestc at 2014-09-29 11:16:07
枪抽打直至全溶???抽打多长时间？？
做原位杂交时，标记探针可以用枪抽打进行DNA的打断啊。。。。。
为什么不等待DNA自然干燥后，加入水或TE让其自行溶解呢？？
从步骤上看，问题不是很大。
今后建议在加提取液 ...

抽打一分钟左右 ，那那加入多少RNA酶呢   ，就是EP管放在架子上颠倒混匀
赞一下 回复此楼
我可以哭泣，可以悲伤，但我不可以不坚强。
7楼2014-10-09 18:45:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吉部落zy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 564539962 at 2014-10-02 20:59:14
实验操作过程中得戴手套戴口罩操作，一些实验需要的东西也得是无酶的，小心谨慎一些，应该就没问题了

这样能用pcr么
回复此楼
我可以哭泣，可以悲伤，但我不可以不坚强。
8楼2014-10-09 18:45:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吉部落zy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 就会提核酸 at 2014-10-01 14:11:39
不是降解，而是杂质残留导致电泳出现这样的情况。

请问这样可以用于pcr么
赞一下 回复此楼
我可以哭泣，可以悲伤，但我不可以不坚强。
9楼2014-10-09 18:46:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

就会提核酸

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
吉部落zy: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-10-10 16:08:18
必须试，而且试最不好看的样品。注意尽可能少用DNA就行。如果不成，再发帖以帮你解决。
赞一下 回复此楼
10楼2014-10-09 20:03:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 吉部落zy 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 08工学调剂 +5 用户573181 2026-03-20 5/250 2026-03-20 15:47 by xia_2003
[考研] 085600材料与化工 +6 安全上岸！ 2026-03-16 6/300 2026-03-20 15:07 by lbsjt
[考研] 265求调剂 +9 梁梁校校 2026-03-19 9/450 2026-03-20 12:33 by lature00
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +10 墨墨漠 2026-03-18 11/550 2026-03-20 11:57 by 学员8dgXkO
[考研] 材料专硕英一数二306 +6 z1z2z3879 2026-03-18 6/300 2026-03-20 08:49 by xingguangj
[考研] 求调剂 +3 暗涌afhb 2026-03-16 3/150 2026-03-20 00:28 by 河南大学校友
[考研] 0703化学调剂 +10 妮妮ninicgb 2026-03-15 14/700 2026-03-19 22:59 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学调剂 ，六级已过，有科研经历 +12 曦熙兮 2026-03-15 12/600 2026-03-19 19:42 by maocaozhuxi
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +10 慕寒mio 2026-03-16 10/500 2026-03-19 15:26 by 丁丁*
[考研] 一志愿福大288有机化学，求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 332求调剂 +3 ydfyh 2026-03-17 3/150 2026-03-19 10:14 by 功夫疯狂
[考研] 304求调剂 +6 司空. 2026-03-18 6/300 2026-03-18 23:03 by 星空星月
[考研] 330求调剂 +3 小材化本科 2026-03-18 3/150 2026-03-18 21:55 by 无懈可击111
[考研] 311求调剂 +11 冬十三 2026-03-15 12/600 2026-03-18 14:36 by 星空星月
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考研] 268求调剂 +6 简单点0 2026-03-17 6/300 2026-03-18 09:04 by 无际的草原
[考博] 26申博 +4 八6八68 2026-03-16 4/200 2026-03-17 13:00 by 轻松不少随
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭