24小时热门版块排行榜    

查看: 3357  |  回复: 11

吉部落zy

金虫 (小有名气)

[求助] 为什么提取植物全基因组DNA总是降解呢?? 已有3人参与

图上是我提取的DNA  我以为是植物放在-20衰老了  (图1)又去外面踩了绿叶回来提取发现还是有点降解(图2靠近marker)是什么原因导致DNA降解呢?
、

为什么提取植物全基因组DNA总是降解呢??
2014  09 24 .png


为什么提取植物全基因组DNA总是降解呢??-1
2014-09-27 17 小时 30 分钟.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

我可以哭泣,可以悲伤,但我不可以不坚强。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-09-28 18:52:35
可以把您的提取步骤贴上来,这样才好分析是哪里出了问题哈
降解无怪乎几种原因:
1,加入提取液后,若是65度提取,时间太久,有可能造成部分降解。
2,降入氯仿/异戊醇后,剧烈混匀时间太久,造成部分DNA断裂
3,打碎组织时最好用液氮处理后研磨的方式,用珠子打碎在后期混匀过程中也容易造成DNA断裂
2楼2014-09-28 09:50:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吉部落zy

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2014-09-28 09:50:06
可以把您的提取步骤贴上来,这样才好分析是哪里出了问题哈
降解无怪乎几种原因:
1,加入提取液后,若是65度提取,时间太久,有可能造成部分降解。
2,降入氯仿/异戊醇后,剧烈混匀时间太久,造成部分DNA断裂
3 ...

1、CTAB溶液预热  2、研磨液氮 成粉末(肉质叶不好磨)  3、把粉末转移到含有抽提液的离心管中
4、 在65℃加热60min,不时搅动。
5、 加等体积氯仿/异戊醇抽提, 混合10min,重复一次  1000转离心5min
6、取上清加入1/2体积、5M NaCl 、加等体积,-20℃预冷的异丙醇 -20℃放置1小时
7、4℃ 12000rpm 离心15分钟
8、75%乙醇洗2次  10000rpm 离心3分钟
9、37℃ 烘干  约15钟
10、加150ul ddH2O溶解,用枪抽打直至全溶
15、加3ul RNAase 37℃消化1h分钟. 4度过夜放入-20保存
我可以哭泣,可以悲伤,但我不可以不坚强。
3楼2014-09-28 15:46:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
吉部落zy(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-10-04 22:15:21
吉部落zy: 金币+1, ★有帮助 2014-10-16 10:13:54
枪抽打直至全溶???抽打多长时间??
做原位杂交时,标记探针可以用枪抽打进行DNA的打断啊。。。。。
为什么不等待DNA自然干燥后,加入水或TE让其自行溶解呢??
从步骤上看,问题不是很大。
今后建议在加提取液时就加入RNAase ,这样在后面抽提时RNAase 有可被除去,最后加,DNA中则混有RNAase 。
加入氯仿/异戊醇之后的10分钟时如何混匀的啊??剧烈震荡?斡旋?还是温柔旋转?
4楼2014-09-29 11:16:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

就会提核酸

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
吉部落zy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-04 22:15:29
吉部落zy: 金币+1, ★有帮助 2014-10-16 10:14:12
不是降解,而是杂质残留导致电泳出现这样的情况。
5楼2014-10-01 14:11:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

564539962

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
吉部落zy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-04 22:15:38
吉部落zy: 金币+1, ★有帮助 2014-10-16 10:14:18
实验操作过程中得戴手套戴口罩操作,一些实验需要的东西也得是无酶的,小心谨慎一些,应该就没问题了
6楼2014-10-02 20:59:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吉部落zy

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by chenguestc at 2014-09-29 11:16:07
枪抽打直至全溶???抽打多长时间??
做原位杂交时,标记探针可以用枪抽打进行DNA的打断啊。。。。。
为什么不等待DNA自然干燥后,加入水或TE让其自行溶解呢??
从步骤上看,问题不是很大。
今后建议在加提取液 ...

抽打一分钟左右 ,那那加入多少RNA酶呢   ,就是EP管放在架子上颠倒混匀
我可以哭泣,可以悲伤,但我不可以不坚强。
7楼2014-10-09 18:45:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吉部落zy

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 564539962 at 2014-10-02 20:59:14
实验操作过程中得戴手套戴口罩操作,一些实验需要的东西也得是无酶的,小心谨慎一些,应该就没问题了

这样能用pcr么
我可以哭泣,可以悲伤,但我不可以不坚强。
8楼2014-10-09 18:45:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吉部落zy

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 就会提核酸 at 2014-10-01 14:11:39
不是降解,而是杂质残留导致电泳出现这样的情况。

请问这样可以用于pcr么
我可以哭泣,可以悲伤,但我不可以不坚强。
9楼2014-10-09 18:46:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

就会提核酸

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
吉部落zy: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-10-10 16:08:18
必须试,而且试最不好看的样品。注意尽可能少用DNA就行。如果不成,再发帖以帮你解决。
10楼2014-10-09 20:03:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 吉部落zy 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 3/150 2026-11-01 12:53 by BCdvBAEpt3zm
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 7/350 2026-11-01 12:45 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 7/350 2026-11-01 12:40 by BCdvBAEpt3zm
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 9/450 2026-11-01 12:32 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 10/500 2026-11-01 12:27 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 7/350 2026-11-01 12:27 by BCdvBAEpt3zm
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 11/550 2026-11-01 12:24 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 13/650 2026-11-01 12:14 by BCdvBAEpt3zm
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 16/800 2026-11-01 12:14 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 18/900 2026-11-01 12:11 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 5/250 2026-11-01 11:18 by Equinoxhua
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-01 11:14 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 9/450 2026-11-01 10:53 by BCdvBAEpt3zm
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 7/350 2026-11-01 10:48 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 13/650 2026-11-01 10:27 by BCdvBAEpt3zm
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 26/1300 2026-11-01 10:22 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 21/1050 2026-11-01 06:46 by YXM1FDCSE8Bn
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 03:59 by YXM1FDCSE8Bn
[找工作] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 6/300 2026-11-01 03:56 by YXM1FDCSE8Bn
[文学芳草园] 闲聊 +3 myrtle 2026-10-25 6/300 2026-10-29 15:28 by myrtle
信息提示
请填处理意见