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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 提取土壤微生物中的基因组，为什么DNA片段总是比预期的要小呢？急急急，求解答。。。
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cr7ka8

金虫 (初入文坛)

[求助] 提取土壤微生物中的基因组，为什么DNA片段总是比预期的要小呢？急急急，求解答。。。 已有2人参与

我的方法是先用液氮研磨土壤，再用CTAB法提取DNA，按照试验方案上，DNA应该有40几Kb，但我的都只有20几Kb，不知道那个步骤会使DNA片段变小，求知道的人指点指点，急急急。。。
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1楼 2014-04-19 23:14:48
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cr7ka8: 金币+20, ★★★很有帮助 2014-04-19 23:36:44
这个不是很正常吗？一般都在23k左右，但也不是绝对的，琼脂糖胶在那个尺度的分辨率非常有限，很难说就在多少k，只要不影响后续实验，这个不是问题的

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2楼2014-04-19 23:19:08
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cr7ka8

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-19 23:19:08
这个不是很正常吗？一般都在23k左右，但也不是绝对的，琼脂糖胶在那个尺度的分辨率非常有限，很难说就在多少k，只要不影响后续实验，这个不是问题的

这个DNA下一步要连载体，载体要求DNA片段在30-40K左右，所以不知道这能不能做，还有跑胶（0.8%琼脂糖胶）结果DNA在Lambda HindIII第一条带稍微下面一点，DNA能有多大？？？
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3楼2014-04-19 23:35:31
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by cr7ka8 at 2014-04-19 23:35:31
这个DNA下一步要连载体，载体要求DNA片段在30-40K左右，所以不知道这能不能做，还有跑胶（0.8%琼脂糖胶）结果DNA在Lambda HindIII第一条带稍微下面一点，DNA能有多大？？？...

你提的DNA是环状的，marker是线性的，所以，你那个仅供参考，只要不拖带就好，不会影响后续实验

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4楼2014-04-20 09:29:28
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cr7ka8: 金币+5, ★有帮助 2014-04-20 11:22:51
提土壤微生物好像有别的提取方法吧，不是用ctab的。
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5楼2014-04-20 09:54:41
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cr7ka8

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-20 09:29:28
你提的DNA是环状的，marker是线性的，所以，你那个仅供参考，只要不拖带就好，不会影响后续实验
...

土壤微生物中的DNA都是环状的吗？？？
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6楼2014-04-20 11:23:43
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by cr7ka8 at 2014-04-20 11:23:43
土壤微生物中的DNA都是环状的吗？？？...

原核的是啊，当然也有可能断的

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7楼2014-04-20 13:25:43
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xiangchou812

木虫 (小有名气)
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7314364&target=blank&fpage=1，求关注？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2014-04-23 23:54:59
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