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cr7ka8

金虫 (初入文坛)

[求助] 提取土壤微生物中的基因组,为什么DNA片段总是比预期的要小呢?急急急,求解答。。。 已有2人参与

我的方法是先用液氮研磨土壤,再用CTAB法提取DNA,按照试验方案上,DNA应该有40几Kb,但我的都只有20几Kb,不知道那个步骤会使DNA片段变小,求知道的人指点指点,急急急。。。
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
cr7ka8: 金币+20, ★★★很有帮助 2014-04-19 23:36:44
这个不是很正常吗?一般都在23k左右,但也不是绝对的,琼脂糖胶在那个尺度的分辨率非常有限,很难说就在多少k,只要不影响后续实验,这个不是问题的

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2楼2014-04-19 23:19:08
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cr7ka8

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-19 23:19:08
这个不是很正常吗?一般都在23k左右,但也不是绝对的,琼脂糖胶在那个尺度的分辨率非常有限,很难说就在多少k,只要不影响后续实验,这个不是问题的

这个DNA下一步要连载体,载体要求DNA片段在30-40K左右,所以不知道这能不能做,还有跑胶(0.8%琼脂糖胶)结果DNA在Lambda HindIII第一条带稍微下面一点,DNA能有多大???
3楼2014-04-19 23:35:31
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by cr7ka8 at 2014-04-19 23:35:31
这个DNA下一步要连载体,载体要求DNA片段在30-40K左右,所以不知道这能不能做,还有跑胶(0.8%琼脂糖胶)结果DNA在Lambda HindIII第一条带稍微下面一点,DNA能有多大???...

你提的DNA是环状的,marker是线性的,所以,你那个仅供参考,只要不拖带就好,不会影响后续实验

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-04-20 09:29:28
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
cr7ka8: 金币+5, 有帮助 2014-04-20 11:22:51
提土壤微生物好像有别的提取方法吧,不是用ctab的。
5楼2014-04-20 09:54:41
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cr7ka8

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-20 09:29:28
你提的DNA是环状的,marker是线性的,所以,你那个仅供参考,只要不拖带就好,不会影响后续实验
...

土壤微生物中的DNA都是环状的吗???
6楼2014-04-20 11:23:43
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by cr7ka8 at 2014-04-20 11:23:43
土壤微生物中的DNA都是环状的吗???...

原核的是啊,当然也有可能断的

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-04-20 13:25:43
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xiangchou812

木虫 (小有名气)

8楼2014-04-23 23:54:59
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