| 查看: 2688 | 回复: 15 | ||
xiangchou812木虫 (小有名气)
|
[求助]
求助土壤总DNA提取和16S rDNA扩增 已有5人参与
|
|
|
最近在做土壤微生物多样性研究，结果在总DNA提取和pcr扩增上遇到难题。先是买国内生物公司的土壤DNA提取试剂盒，使用固氮菌通用引物PolF和PolR为引物，TAKARA的rTaq酶扩增，结果为阴性，怀疑国内试剂盒不行，遂换用进口MoBio公司强力土壤DNA提取试剂盒，琼脂糖检测条带挺亮，0D260/280也正常，260/230只有1.2左右，但PCR结果还是阴性，后又合成细菌通用引物27F/2492R，直接以DH5a菌液为模板，可以扩出预期大小条带，但以提取到的土壤DNA为模板，又是阴性。有文献说Mg2+浓度被土壤腐殖质等螯合会抑制PCR，故在反应体系中加入土壤DNA和DH5a菌液混合物为模板，却可扩到明亮做条带。怀疑土壤保存方法有问题，又从院子草地里取新鲜土样，提DNA，PCR结果仍是阴性。来回折腾快一个月了，总是原地踏步，实是无语，特求教大神们，问题会在哪里？感激涕零！ [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
回复此楼» 猜你喜欢
291分工科求调剂
已经有3人回复
-
298求调剂
已经有5人回复
-
272求调剂
已经有4人回复
-
285求调剂
已经有6人回复
-
材料调剂
已经有4人回复
-
面上模板改不了页边距吧？
已经有6人回复
-
307求调剂
已经有6人回复
-
304求调剂
已经有5人回复
-
317一志愿华南理工电气工程求调剂
已经有8人回复
-
272求调剂
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 对细菌进行测序时，测的是16S rDNA还是16S rRNA
已经有25人回复
- 细菌基因组中为什么会有多个16srDNA片段？
已经有11人回复
- 水洗下来的土壤100度烘干一夜后，提取的总DNA没有结果，是什么原因？
已经有5人回复
- DGGE中，提取土壤DNA后做V3扩增，出现两条带
已经有8人回复
- 绝对定量荧光PCR中做标准曲线的DNA的获得。
已经有10人回复
- 各种提取土壤DNA的试剂盒，那个更好
已经有20人回复
- 16S rDNA 鉴定细菌的方法及其注意事项
已经有236人回复
- 16S rRNA序列分析法和16rDNA分析的区别？
已经有7人回复
- 求教 放线菌 16S rDNA 比对
已经有4人回复
- 细菌16S的问题
已经有6人回复
- 土壤微生物DNA提取不出来，是什么原因？
已经有19人回复
- 16S rDNA测序问题
已经有21人回复
- 土壤微生物16s rDNA 18s rDNA 抑制扩增不出来？？？？？？
已经有12人回复
- 鱼肠道微生物DNA的提取方法
已经有22人回复
- 试剂盒提取细菌DNA后，跑胶检测有条带，但是PCR后却无扩增产物。
已经有10人回复
- 土壤总细菌16S PCR-条带不亮的问题
已经有19人回复
- 16S rRNA文库 引物的选择
已经有7人回复
- 通用引物扩增细菌16S rDNA
已经有13人回复
- 16S rRNA 和16S rDNA的区别
已经有10人回复
- 16S rDNA测序问题
已经有3人回复
- 16s rDNA 扩增引物的选择
已经有9人回复
- 16s r DNA扩增出来的片段都是1Kb左右，是不是有问题啊？求助
已经有7人回复
- 16S PCR扩增的问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】细菌鉴定
已经有14人回复
20093651
铁杆木虫 (职业作家)
- MicEPI: 2
- 应助: 212 (大学生)
- 金币: 5307.4
- 散金: 3276
- 红花: 63
- 沙发: 2
- 帖子: 3731
- 在线: 656.6小时
- 虫号: 1176129
- 注册: 2010-12-23
- 专业: 金属材料表面科学与工程
3楼2014-04-24 09:29:21
wubingqi
木虫 (小有名气)
- MicEPI: 1
- 应助: 79 (初中生)
- 金币: 5263.4
- 散金: 10
- 红花: 15
- 帖子: 242
- 在线: 514.8小时
- 虫号: 1049797
- 注册: 2010-06-30
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
4楼2014-04-24 10:04:27
cx13033236
木虫 (小有名气)
- MicEPI: 2
- 应助: 42 (小学生)
- 金币: 1876.9
- 红花: 3
- 帖子: 217
- 在线: 161.3小时
- 虫号: 1543794
- 注册: 2011-12-19
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
9楼2014-04-25 09:16:50
13楼2014-05-04 16:40:16
2楼2014-04-24 08:31:44
cx13033236
木虫 (小有名气)
- MicEPI: 2
- 应助: 42 (小学生)
- 金币: 1876.9
- 红花: 3
- 帖子: 217
- 在线: 161.3小时
- 虫号: 1543794
- 注册: 2011-12-19
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
5楼2014-04-24 10:21:40
xiangchou812
木虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 3783.4
- 帖子: 96
- 在线: 66.4小时
- 虫号: 73882
- 注册: 2005-06-10
- 性别: GG
- 专业: 微生物生态学
6楼2014-04-24 20:46:21
xiangchou812
木虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 3783.4
- 帖子: 96
- 在线: 66.4小时
- 虫号: 73882
- 注册: 2005-06-10
- 性别: GG
- 专业: 微生物生态学
7楼2014-04-24 20:47:48
xiangchou812
木虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 3783.4
- 帖子: 96
- 在线: 66.4小时
- 虫号: 73882
- 注册: 2005-06-10
- 性别: GG
- 专业: 微生物生态学
8楼2014-04-24 20:50:32
20093651
铁杆木虫 (职业作家)
- MicEPI: 2
- 应助: 212 (大学生)
- 金币: 5307.4
- 散金: 3276
- 红花: 63
- 沙发: 2
- 帖子: 3731
- 在线: 656.6小时
- 虫号: 1176129
- 注册: 2010-12-23
- 专业: 金属材料表面科学与工程
10楼2014-04-25 10:34:25
