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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 求助土壤总DNA提取和16S rDNA扩增
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cy198098

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xiangchou812: 金币+1, ★有帮助 2014-04-26 11:22:11
把提出来的DNA样品梯度稀释，再试试吧
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11楼2014-04-25 10:49:37
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lx李欣

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xiangchou812 at 2014-04-24 20:50:32
感谢你的建议，PCR时引物浓度应该是多少呢？谢谢！
...

一般10uM就行了！
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12楼2014-05-04 16:38:17
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lx李欣

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xiangchou812 at 2014-04-24 20:46:21
因为是半道出家来做土壤微生物的，我用的土样是条播的黑麦草根际土，提出来后DNA浓度只有30ng/uL左右，这样还能再稀释吗？您做时模板量用多少呢？
...

我觉得这个浓度应该可以了，我之前P的总DNA就十几二十几ng/uL这样！
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13楼2014-05-04 16:40:16
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zhongzhen

铜虫 (初入文坛)
楼主，你的问题解决了吗？我现在也遇到这样的问题，请不吝赐教！
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14楼2014-12-24 21:48:34
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xiangchou812

木虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by zhongzhen at 2014-12-24 21:48:34
楼主，你的问题解决了吗？我现在也遇到这样的问题，请不吝赐教！

这个好的试剂盒是好，但更重要的可能是PCR扩增的反应体系。比如用高GC含量专用酶或buffer，在反应体系中加BSA等。我当时对提取的样品进行了稀释，然后加了一些BSA，可以扩出来条带，可以试一下。祝好
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15楼2014-12-25 11:11:23
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zhongzhen

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by xiangchou812 at 2014-12-25 11:11:23
这个好的试剂盒是好，但更重要的可能是PCR扩增的反应体系。比如用高GC含量专用酶或buffer，在反应体系中加BSA等。我当时对提取的样品进行了稀释，然后加了一些BSA，可以扩出来条带，可以试一下。祝好...

好的，我试一下，谢谢！
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16楼2014-12-25 13:49:01
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