应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量PCR 疑难杂症
51/1返回列表
查看: 1149  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

忘记将来

木虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量PCR 疑难杂症 已有2人参与

这几天跑的荧光定量PCR结果很糟糕；请有经验的大侠指点一二：
基因拷贝数偏低，Ct值开始40左右，优化后30-32，但是问题出现了，NTC也有扩增了，换了一管新的引物（干粉稀释）结果还是一样，根据溶解曲线判断应该是产物
在荧光定量前，用普通PCR鉴定过，条带大小和测序结果都对；用荧光定量pcr的结果跑电泳，条带位置跟以前一样（包括NTC）；30左右拷贝数应该也有10的3次方了，难道是产物污染？？？
还有就是荧光信号很低，会是假阳性扩增么？？？？还是因为模板的拷贝数很低造成的？模板加量已经很多，为什么实验组跟NTC的Ct值几乎一样呢？？？？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-25 13:15:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

忘记将来

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-09-28 14:27:33
NTC也有扩增的话，就可能是引物二聚体，降低一下引物的浓度试试。
当然，此前要确保不是气溶胶污染咯。

不是引物二聚体，就是我扩的产物
赞一下 回复此楼
7楼2014-09-29 10:45:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-09-25 21:37:18
忘记将来: 金币+3, 谢谢 2014-09-26 09:10:25
你的阴性对照，或者说水是什么水？是公司买的嘛？还是去离子水灭菌的？
以前也遇到过类似现象，换了水之后就行了，不知道是否符合你的情况
赞一下 回复此楼
2楼2014-09-25 13:59:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

忘记将来

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2014-09-25 13:59:15
你的阴性对照，或者说水是什么水？是公司买的嘛？还是去离子水灭菌的？
以前也遇到过类似现象，换了水之后就行了，不知道是否符合你的情况

不是买的，是灭菌的超纯水。
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-25 15:00:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 忘记将来 at 2014-09-25 15:00:16
不是买的，是灭菌的超纯水。...

是的哈，我就是用的灭菌超纯水原来。。。。
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-26 08:50:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可 +3 丹青奶盖 2026-03-26 3/150 2026-03-26 10:06 by yeahyou
[考研] 招08考数学 +8 laoshidan 2026-03-20 17/850 2026-03-25 17:52 by 一个红太阳
[考研] 材料调剂 +3 iwinso 2026-03-23 3/150 2026-03-25 11:29 by greychen00
[考研] 299求调剂 +7 shxchem 2026-03-20 9/450 2026-03-25 10:41 by lbsjt
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 环境学硕288求调剂 +8 皮皮皮123456 2026-03-22 8/400 2026-03-23 23:47 by 热情沙漠
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +7 vv迷 2026-03-22 7/350 2026-03-23 23:44 by Txy@872106
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[基金申请] 学校已经提交到NSFC，还能修改吗？ 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭