应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量PCR 疑难杂症
51/1返回列表
查看: 1147  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

忘记将来

木虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量PCR 疑难杂症 已有2人参与

这几天跑的荧光定量PCR结果很糟糕；请有经验的大侠指点一二：
基因拷贝数偏低，Ct值开始40左右，优化后30-32，但是问题出现了，NTC也有扩增了，换了一管新的引物（干粉稀释）结果还是一样，根据溶解曲线判断应该是产物
在荧光定量前，用普通PCR鉴定过，条带大小和测序结果都对；用荧光定量pcr的结果跑电泳，条带位置跟以前一样（包括NTC）；30左右拷贝数应该也有10的3次方了，难道是产物污染？？？
还有就是荧光信号很低，会是假阳性扩增么？？？？还是因为模板的拷贝数很低造成的？模板加量已经很多，为什么实验组跟NTC的Ct值几乎一样呢？？？？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-25 13:15:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

忘记将来

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-09-28 14:27:33
NTC也有扩增的话，就可能是引物二聚体，降低一下引物的浓度试试。
当然，此前要确保不是气溶胶污染咯。

不是引物二聚体，就是我扩的产物
赞一下 回复此楼
7楼2014-09-29 10:45:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-09-25 21:37:18
忘记将来: 金币+3, 谢谢 2014-09-26 09:10:25
你的阴性对照，或者说水是什么水？是公司买的嘛？还是去离子水灭菌的？
以前也遇到过类似现象，换了水之后就行了，不知道是否符合你的情况
赞一下 回复此楼
2楼2014-09-25 13:59:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

忘记将来

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2014-09-25 13:59:15
你的阴性对照，或者说水是什么水？是公司买的嘛？还是去离子水灭菌的？
以前也遇到过类似现象，换了水之后就行了，不知道是否符合你的情况

不是买的，是灭菌的超纯水。
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-25 15:00:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 忘记将来 at 2014-09-25 15:00:16
不是买的，是灭菌的超纯水。...

是的哈，我就是用的灭菌超纯水原来。。。。
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-26 08:50:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +3 kongweilin 2026-03-26 4/200 2026-03-26 08:26 by kongweilin
[考研] 274求调剂 +10 顾九笙要谦虚 2026-03-24 14/700 2026-03-26 01:09 by 15366876211
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 材料与化工考研调剂 +9 孅華 2026-03-22 9/450 2026-03-25 13:09 by cmz0325
[考研] 359求调剂 +3 王了个楠 2026-03-25 3/150 2026-03-25 12:50 by Dyhoer
[考研] 271求调剂 +4 生如夏花… 2026-03-22 4/200 2026-03-25 11:25 by userper
[考研] 材料学硕，求调剂 6+4 糖葫芦888ll 2026-03-22 9/450 2026-03-25 11:19 by greychen00
[考研] 289求调剂 +9 怀瑾握瑜l 2026-03-20 9/450 2026-03-25 11:02 by userper
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +6 @taotao 2026-03-19 6/300 2026-03-25 08:37 by 木托莫露露
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +5 谷雨上岸 2026-03-23 6/300 2026-03-24 16:32 by laoshidan
[考研] 321求调剂 +4 Ymlll 2026-03-24 4/200 2026-03-24 14:44 by sprinining
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工 264分各科过A区国家线 +3 哈哈157349 2026-03-21 3/150 2026-03-24 14:11 by zhyzzh
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考研] 070300，一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 315分，诚求调剂，材料与化工085600 +3 13756423260 2026-03-22 3/150 2026-03-22 20:11 by edmund7
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 279求调剂 +5 红衣隐官 2026-03-21 5/250 2026-03-21 14:59 by lature00
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭