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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 构建真核表达载体ppic9k问题
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aabbwestone

银虫 (初入文坛)

[求助] 构建真核表达载体ppic9k问题 已有2人参与

急！！！！
      准备构建真核表达载体ppic9k，目的基因是原核基因，目的基因是插在两个MCS之间的，MCS在信号肽之后，信号肽有自己的ATG，目的基因起始的ATG是否要保留，还是必须去掉，求助各路大神。
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rightbackinthewater
1楼 2014-09-23 00:25:57
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Dearstar

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Dearstar at 2014-09-28 11:08:21
pPIC9K上自身携带的起始密码子位于信号肽前端 ，当你把序列插入多克隆位点之后，系统会自动从上住下表达 ，不管你有没有起始密码子，直到遇到ATT终止，故你自身带有的ATG是可去可不去的。如果可以去就顺便去掉，如果 ...

遇到TAA终止。。。sorry写错了
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4楼2014-09-28 14:52:56
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sueyoung9

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
aabbwestone: 金币+5, ★有帮助, 酶切位点之前的信号肽有起始密码子，最后信号肽是要在菌体内切掉的，目的基因不加起始密码子不会有影响吗 2014-09-23 12:35:00
如果有ATG就不要保留了，我最近构建一载体，刚好酶切位点有起始密码子，我就去掉了目的基因的起始密码子，最后照样表达出蛋白了

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-09-23 00:58:46
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Dearstar

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-09-29 11:26:05
pPIC9K上自身携带的起始密码子位于信号肽前端 ，当你把序列插入多克隆位点之后，系统会自动从上住下表达 ，不管你有没有起始密码子，直到遇到ATT终止，故你自身带有的ATG是可去可不去的。如果可以去就顺便去掉，如果不能去留着也没有什么影响，然后建议楼主将密码子进行优化，可能原核的到真核表达，按真核表达系统的进行优化应该较好。
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3楼2014-09-28 11:08:21
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