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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 设计引物时，如何加酶切位点和信号肽？
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

[求助] 设计引物时，如何加酶切位点和信号肽？ 已有1人参与

实验室新筛选出了一株高产纤维素酶的真菌，只知道其属于木霉属，从Genebank上能得到该相关种属的序列，根据这些序列设计引物来扩增该真菌中的纤维素酶基因，根据软件设计引物，怎样检测或者添加信号肽，以及酶切位点？可以不加信号肽和酶切位点么？还有用这种方法来克隆真菌中的纤维素酶基因可行么？
     小女子刚接触基因这块，实验室的师兄，师姐都没有做过分子这方面，难度相当大，还望广大虫友给予帮助。
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1楼 2014-09-19 20:22:43
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liukun261

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+4, 鼓励回帖交流！ 2014-09-19 23:46:21
wu-ke-da: 金币+5, 谢谢！ 2014-09-25 09:11:26
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2楼2014-09-19 21:52:30
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
2楼: Originally posted by liukun261 at 2014-09-19 21:52:30
楼主好
    我也不是做分子很长的时间，就是在实验室摸索了一年吧。
    要在引物上加酶切位点是因为将来把你的目的片段连接在克隆载体上进行测序，测序完成后还要将你的目的片段从克隆载体上用你设计的酶切位点切 ...

哦，懂了，谢谢。还有一个问题，是不是不同载体上面标记的基因不一样，是不是会影响后续的表达？选择载体的时候，要考虑哪些因素呢？
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3楼2014-09-22 11:00:45
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liukun261

禁虫 (小有名气)
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4楼2014-09-23 21:35:23
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
4楼: Originally posted by liukun261 at 2014-09-23 21:35:23
是的，不同的载体所带的标签是不一样的，关键看你后面想做什么。
如果做表型的话，我们实验室使用的是pCanG-HA载体，做定位使用的是
pCAMBIA1302-GFP载体。...

哦，懂了，像重组的载体除了做表达，做定位，还可以做什么啊？
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5楼2014-09-24 14:43:57
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liukun261

禁虫 (小有名气)
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6楼2014-09-24 19:33:28
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
6楼: Originally posted by liukun261 at 2014-09-24 19:33:28
可以做的还有很多了，比如BiFC 或者酵母双杂交，ChiP了，这些应该都可以做的，我们实验室主要就是做表型和亚细胞定位。要做什么关键看你这个基因的情况了把。...

噢噢噢，谢谢！
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7楼2014-09-25 09:10:59
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