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hajierlove

铜虫 (正式写手)

[求助] 2600bp基因扩增 已有6人参与

2600bp基因扩增,用green mix,pcr体系,模板,引物各1u,水,9.5,mix12.5.反应程序,95度2min,95度30s,55度30s,72度3min,38个循环,72度5min。10保持。
大神们帮忙看看有什么问题,有没有好用一点的酶推荐
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踏实
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小小c的123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-10-05 12:52:45
有些问题大家回复过,我就结合我的经历提醒一下。首先,模板的浓度,这个有时候会忽略,我一般用50ng/ul的浓度;还有就是果断换一支酶试试,我之前遇到过酶污染了,一直p不出...都不行的话,可以真的要从引物入手了...
看了你的程序有两个疑问:你的预变性时间才2min,会不会有点短了;循环次数是38次,会不会加大你的错配概率...
7楼2014-09-21 11:18:45
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

试了很多次p不出来,其他700bp的都做到蛋白表达了,亲们,help
踏实
2楼2014-09-18 22:38:18
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-19 16:29:16
知道序列直接去合成吧。
可以分段扩增,有个重叠就好

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2014-09-18 22:47:39
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kuenyunliu

铜虫 (初入文坛)

用Q5 或者phusion试试
你只问了要什么酶推荐 以上
4楼2014-09-18 23:25:05
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