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hajierlove

铜虫 (正式写手)

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专业: 生态学

[求助] 2600bp基因扩增已有6人参与

2600bp基因扩增，用green mix,pcr体系，模板，引物各1u，水，9.5，mix12.5.反应程序，95度2min，95度30s，55度30s，72度3min，38个循环，72度5min。10保持。
大神们帮忙看看有什么问题，有没有好用一点的酶推荐

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踏实

1楼 2014-09-18 22:37:33

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小小c的123

新虫 (初入文坛)

应助: 2 (幼儿园)
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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-10-05 12:52:45

有些问题大家回复过，我就结合我的经历提醒一下。首先，模板的浓度，这个有时候会忽略，我一般用50ng/ul的浓度；还有就是果断换一支酶试试，我之前遇到过酶污染了，一直p不出...都不行的话，可以真的要从引物入手了...
看了你的程序有两个疑问：你的预变性时间才2min，会不会有点短了；循环次数是38次，会不会加大你的错配概率...