应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 这样的引物能做荧光定量PCR吗？
51/1返回列表
查看: 2183  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

赵晓楠zxn

金虫 (初入文坛)

[求助] 这样的引物能做荧光定量PCR吗？ 已有3人参与

图为荧光定量引物的验证。从左到右依次为Marker DL5000、引物1、引物2、内参GAPDH。虽说目的条带跑出来了，但最下方引物二聚体也很明显，包括内参也存在引物二聚体，三对引物PCR反应的退火温度分别为53℃、55℃、57℃，后来又试着把三对的退火温度统一设为60℃，依旧出现引物二聚体。这种情况下引物还能用做荧光定量PCR吗？
引物具体信息如下：（1-F %GC为40%，TM值为53.7；1-R %GC为40%，TM值为53.7）；（2-F %GC为45%，TM值为55.8；2-R %GC为40%，TM值为53.7）；（GAPDH-F %GC为61.1%，TM值为59.6；GAPDH-R %GC为50%，TM值为57.8.）

这样的引物能做荧光定量PCR吗？
20140912.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
在学术的汪洋里，扑腾。
1楼 2014-09-14 16:52:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

赵晓楠zxn

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dxh86412 at 2014-09-15 00:24:15
最好能够没有二聚体，因为二聚体主要影响扩增效率，但是如果没办法的话，方便的话做个标准曲线看下扩增效率怎么样，如果在95-105%之间，那用来做定量肯定没问题，如果太低或太高，就只能重新设计了。还有你也可以提 ...

我也提高过退火温度，60度，但是还是出现了二聚体。头疼，荧光定量我没做过，好难啊。
赞一下 回复此楼
在学术的汪洋里，扑腾。
4楼2014-09-15 08:42:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-14 23:50:11
赵晓楠zxn: 金币+3, ★有帮助 2014-09-15 17:05:10
没有杂带理论上可以做定量的，再重新设计一下退火温度就好了，引物二聚体的出现很大程度是因为退火温度不合适……住顺利！
赞一下 回复此楼
他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
2楼2014-09-14 18:31:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dxh86412

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
赵晓楠zxn: 金币+5, ★有帮助 2014-09-15 08:40:43
最好能够没有二聚体，因为二聚体主要影响扩增效率，但是如果没办法的话，方便的话做个标准曲线看下扩增效率怎么样，如果在95-105%之间，那用来做定量肯定没问题，如果太低或太高，就只能重新设计了。还有你也可以提高退火温度试试，一般都要在60左右的~
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-15 00:24:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
赵晓楠zxn: 金币+2, ★有帮助 2014-09-15 17:05:16
引物二聚体产生本底荧光，减少用量就行。
赞一下 回复此楼
5楼2014-09-15 12:39:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工调剂 +7 A-哆啦Z梦 2026-03-23 12/600 2026-03-23 23:16 by 星空星月
[考研] 材料专业求调剂 +11 hanamiko 2026-03-18 11/550 2026-03-23 23:12 by peike
[考研] 材料专硕英一数二306 +8 z1z2z3879 2026-03-18 8/400 2026-03-23 20:49 by baobaoye
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +3 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 3/150 2026-03-23 20:47 by pswait
[考研] 招08考数学 +6 laoshidan 2026-03-20 14/700 2026-03-23 14:37 by 15614359529
[考研] 一志愿东华大学化学070300，求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 287求调剂 +8 晨昏线与星海 2026-03-19 9/450 2026-03-22 17:01 by i_cooler
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学297求调剂 +3 Daisy☆ 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:45 by ColorlessPI
[考研] 302求调剂 +12 呼呼呼。。。。 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:29 by ColorlessPI
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +12 yangfz 2026-03-17 12/600 2026-03-21 03:30 by JourneyLucky
[考研] 初始318分求调剂（有工作经验） +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +4 @taotao 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 288求调剂，一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭