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忘记将来木虫 (正式写手)
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设计荧光定量PCR引物 已有2人参与
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问几个关于荧光定量设计引物的问题， 1：设计引物用的序列是不是只能是cDNA？ 2：开始分析待测序列时，是不是先blast这个序列 然后下载比对找保守区的序列 设计引物啊？ 3：设计好的引物，分析其特异性时，是不是拿设计的引物去blast，如果blast的结果没有待测的物种就是可以用的。 我是这么理解的 也不知道对不对 使用的软件是 Beacon Designer，哪位高手可以把这个详细步骤传授一下，初学者 问的问题有点弱。 |
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2楼2014-07-15 19:09:04
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| 直接把待测序列放在NCBI的primer blast里面，设定产物大小150-250bp，引物上下游横跨至少一个内含子再把最下面错配分子大小改成10000（我一般改成这个）点primer blast即可。里面会有好几对引物供你选择，选择错配产物少的，最好是没有的几对引物合成即可。做Realtime之前先用这几对引物扩增下你的模板，跑个胶看看，没杂带和二聚体就能用了~ |
3楼2014-07-18 13:52:52
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