应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 分子克隆连接验证问题
81/1返回列表
查看: 1094  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

五维度的爱

金虫 (小有名气)

[求助] 分子克隆连接验证问题 已有4人参与

最近把所克隆的目的基因连接到pET-28a载体上，转化后挑菌用载体的通用引物验证不出来，但用特异性的引物能够验证出目的基因，但测序时总是无信号，这个该怎么解？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-09 12:32:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qapollo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以尝试扩增出目的基因后，PCR产物测序
赞一下 回复此楼
2楼2014-09-09 12:52:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-09 18:11:11
五维度的爱: 金币+1, ★有帮助 2014-09-09 20:51:13
楼主测序的时候用的通用引物还是特异性引物???如果是通用引物那就正常了,你用通用引物没有P出来，再测序也有问题，有可能是pET-28a载体有问题！楼主可以用双酶切产物或则特异性引物的PCR产物去测序，如果正确说明你目的片断连接上去了，但是你的载体有问题，那就只能从新弄个载体从新连接了！
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-09 13:08:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bwangel

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by qapollo at 2014-09-09 12:52:49
可以尝试扩增出目的基因后，PCR产物测序

这样测序目的序列不全
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-09 16:03:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
载体的问题，是否把载体弄错了？对应载体的通用引物是肯定能扩出来的
赞一下 回复此楼
5楼2014-09-09 16:05:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

五维度的爱

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by qapollo at 2014-09-09 12:52:49
可以尝试扩增出目的基因后，PCR产物测序

但是不能确定载体是否有问题
赞一下 回复此楼
6楼2014-09-09 20:53:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinshengfang

木虫 (正式写手)
我觉得可能没有连接上去，因为单菌做pcr本来就不准确。特异性引物可能只是pcr出的游离片段。
赞一下 回复此楼
生物催化
7楼2014-11-05 19:38:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

myheat

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

反向测，如果正向没信号

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
8楼2014-11-05 21:05:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 五维度的爱 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 CyTWnZiM0cS6 2026-08-02 3/150 2026-08-02 20:44 by 3VGOm6paSgqv
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 5/250 2026-08-02 20:32 by 3VGOm6paSgqv
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 5/250 2026-08-02 20:31 by 3VGOm6paSgqv
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 6/300 2026-08-02 20:21 by 3VGOm6paSgqv
[基金申请] 这种情况还有戏吗 +5 drbart 2026-07-27 12/600 2026-08-02 20:21 by drbart
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 9/450 2026-08-02 20:18 by 3VGOm6paSgqv
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 10/500 2026-08-02 20:12 by 3VGOm6paSgqv
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 11/550 2026-08-02 20:11 by 3VGOm6paSgqv
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +11 archvillain 2026-08-02 13/650 2026-08-02 20:09 by symmetry
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 17/850 2026-08-02 19:58 by 3VGOm6paSgqv
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 6/300 2026-08-02 18:34 by ca3DVAx4OB19
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 9/450 2026-08-02 18:27 by ca3DVAx4OB19
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 20/1000 2026-08-02 18:04 by ca3DVAx4OB19
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +18 低垂的野花 2026-07-31 24/1200 2026-08-02 16:03 by swallowwh
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +15 布布和一二 2026-07-30 21/1050 2026-08-02 10:56 by iaeyuan
[教师之家] 基础研究怎么拉横向，学校到款任务越来越多，难以完成 拉横向，都有哪些途径啊 +8 锦衣卫寒战 2026-07-28 10/500 2026-08-02 10:00 by 锦衣卫寒战
[考博] 2027年申博 50+3 射雕英雄胜 2026-07-30 3/150 2026-08-02 09:36 by lfy8008
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 7/350 2026-08-02 07:59 by 88817753
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
[有机交流] 产物和副产物价值比较 30+4 小汤02 2026-07-27 5/250 2026-07-30 12:44 by czyzsu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭