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还重名啊

铜虫 (小有名气)

[求助] pBI121载体 提质粒浓度好低啊。。 已有7人参与

pBI121载体 提质粒浓度好低啊。有哪位同仁用过帮忙解决下啊,提质粒浓度总是30ng左右,双酶切后续没发做了啊,跪求大神帮忙!
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-09-01 20:30:15
还重名啊: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-09-06 09:45:01
最近我也遇到了保存的菌提不出质粒、量很少的问题。
我是直接把质粒重新转化的,然后提质粒,就很多了。
估计是菌体有问题了。
2楼2014-09-01 16:35:31
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wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-09-01 20:30:21
有些质粒在大肠杆菌中的拷贝本来就很低,可以多收集菌体……
他日扬翼九万里,历大千世界,定我红尘心!
3楼2014-09-01 17:19:28
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huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-09-03 18:48:55
这个载体是表达载体,拷贝数低于克隆载体,所以提质粒较少,可以多提取点,洗脱时候少加点洗脱液来提高浓度.质粒拷贝多少跟载体本身有关跟宿主菌关系不大!
7楼2014-09-02 13:10:54
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 还重名啊 at 2014-09-02 12:35:06
你用的是什么菌株啊...

DH5a没做出来,换的XL1-BLUE
9楼2014-09-04 08:51:15
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

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质粒拷贝数低,增加菌体量,裂解液过1-2个柱子。
10楼2014-09-04 11:19:57
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普通回帖

我欲乘风归去

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-09-01 20:30:29
貌似是低拷贝质粒,我记得当时我提PBI101提取了100ml
4楼2014-09-01 20:20:59
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还重名啊

铜虫 (小有名气)

你用的是什么菌株啊
5楼2014-09-02 12:33:28
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还重名啊

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-09-01 16:35:31
最近我也遇到了保存的菌提不出质粒、量很少的问题。
我是直接把质粒重新转化的,然后提质粒,就很多了。
估计是菌体有问题了。

你用的是什么菌株啊
6楼2014-09-02 12:35:06
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hzau_zsmj

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-09-03 18:49:02
这个问题我也遇到过,可以通过将多个上清洗脱到一个柱子里提高浓度
。。。。。。
8楼2014-09-03 09:42:10
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