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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » pBI121载体 提质粒浓度好低啊。。
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还重名啊

铜虫 (小有名气)

[求助] pBI121载体 提质粒浓度好低啊。。 已有7人参与

pBI121载体 提质粒浓度好低啊。有哪位同仁用过帮忙解决下啊，提质粒浓度总是30ng左右，双酶切后续没发做了啊，跪求大神帮忙！
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1楼 2014-09-01 15:22:53
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-01 20:30:15
还重名啊: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-09-06 09:45:01
最近我也遇到了保存的菌提不出质粒、量很少的问题。
我是直接把质粒重新转化的，然后提质粒，就很多了。
估计是菌体有问题了。
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2楼2014-09-01 16:35:31
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wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-01 20:30:21
有些质粒在大肠杆菌中的拷贝本来就很低，可以多收集菌体……
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他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
3楼2014-09-01 17:19:28
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huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-03 18:48:55
这个载体是表达载体,拷贝数低于克隆载体,所以提质粒较少,可以多提取点,洗脱时候少加点洗脱液来提高浓度.质粒拷贝多少跟载体本身有关跟宿主菌关系不大!
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7楼2014-09-02 13:10:54
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 还重名啊 at 2014-09-02 12:35:06
你用的是什么菌株啊...

DH5a没做出来，换的XL1-BLUE
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9楼2014-09-04 08:51:15
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒拷贝数低，增加菌体量，裂解液过1-2个柱子。
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10楼2014-09-04 11:19:57
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普通回帖

我欲乘风归去

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-01 20:30:29
貌似是低拷贝质粒，我记得当时我提PBI101提取了100ml
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。
4楼2014-09-01 20:20:59
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还重名啊

铜虫 (小有名气)
你用的是什么菌株啊
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5楼2014-09-02 12:33:28
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还重名啊

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-09-01 16:35:31
最近我也遇到了保存的菌提不出质粒、量很少的问题。
我是直接把质粒重新转化的，然后提质粒，就很多了。
估计是菌体有问题了。

你用的是什么菌株啊
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6楼2014-09-02 12:35:06
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hzau_zsmj

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-03 18:49:02
这个问题我也遇到过，可以通过将多个上清洗脱到一个柱子里提高浓度
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。。。。。。
8楼2014-09-03 09:42:10
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