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lksyb

金虫 (正式写手)

[求助] 请问大家,大肠杆菌表达量突然变低是什么原因?已有2人参与

我有一个真菌来源的重组蛋白,大肠杆菌表达的(pET28a /Rosetta)。大概一年前做的,最近要补点实验,但发现去年的菌种几乎无表达了.于是重新提质粒转化,但表达量还是很低,几乎纯化不到目的蛋白。我又重新PCR阔了基因,酶切连接转化,试了pET28a/pET30a/SUMO标签/GST标签,还试过截短表达。但目的蛋白均无表达。现在完全找不到原因,请问大家该如何解决这一问题啊?
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7楼2021-03-08 22:15:17
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bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-04 19:30:48
时间长,保存的不好,可能是需要多活化下的,
2楼2014-08-25 22:44:17
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令狐少陈

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是你iptg失效了?多加点看看,温度37转速200试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
多多交流,海纳百川
4楼2014-08-28 00:28:03
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

楼主你的问题解决了吗?我也遇到了类似的问题,不知道怎么解决
5楼2014-09-04 16:51:14
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