24小时热门版块排行榜    

查看: 3725  |  回复: 10
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 huangdi5217 的 4 个金币

huangdi5217

铁杆木虫 (正式写手)


[交流] 大肠杆菌转化后长的很慢或者不长

各位虫友,小弟最近遇到一件怪事——目的基因和载体连接后转化大肠杆菌JM109后长出的菌落生长很慢,挑单菌落摇试管后还是不长或者很慢,摇了12个小时不太浑,摇了18个小时还是不很浑,根本提不出质粒,已经出现了好几次了,咋回事呢,各位有什么经验呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gaojuan1985

新虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你要表达的外源基因对大肠杆菌的生长有没有毒性?你用的什么宿主菌?
有一些外源基因表达的蛋白是对大肠杆菌有毒性的。当你用BL21DE3这种不严谨的宿主菌时,即使你没有诱导,也可能有泄漏表达,表达的产物就影响了大肠杆菌的生长。
看你的外源基因表达产物对大肠杆菌有无毒性,可以通过在平板上生长速度来判断,如果生长很慢的话,就有这个可能。你可以换成BL21 pLys S或pLysE这种严谨性的宿主菌,先让大肠杆菌长起来,OD高一些,再诱导短暂的时间就收菌。
7楼2013-03-01 17:10:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
huangdi5217: 金币+1, 这个原因被我排除掉了,我做了对照菌实验,可是依然出现问题,我用的抗生素是安普霉素抗性 2012-10-08 11:11:14
平板中的抗生素部分失效,长出的克隆是杂菌。如果你用的是氨苄的板,这这种情况比较容易发生。到氨苄的板时要等培养基冷却到50度以下。
3楼2012-10-08 04:58:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

看天

木虫 (知名作家)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-10-08 03:10:39
我们有时也出现平板张液体部长的情况 不知何因
2楼2012-10-07 22:12:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看天: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-02 21:43:25
我也是遇到这种问题,好像不知道怎样又正常了,困惑
4楼2012-10-10 09:14:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhoumin1108

铁虫 (小有名气)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
yqbter: 金币+1, 鼓励发帖! 2012-11-02 21:21:11
长出来的是假阳性的。重新做好了。
5楼2012-11-02 19:55:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

看天

木虫 (知名作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by sxxuan at 2012-10-10 09:14:39
我也是遇到这种问题,好像不知道怎样又正常了,困惑

是啊 总是实验莫名地失败失败 重复重复 找不到原因 不知道哪一天又突然变好了
6楼2012-11-02 21:44:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wei8066182

铁虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也遇到同样的问题了,求解决方法
8楼2014-04-16 10:07:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2601182962

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也遇到这样的问题,这个问题你解决了吗
9楼2016-05-05 17:06:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天兆9611

铁虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也遇到了,我的大肠杆菌是导入了红霉素抗性质粒,在300μg/mlL红霉素含量的LB培养基中培养了36小时了还是不怎么长,瓶子不浑浊,愁死我了。
10楼2022-03-28 09:03:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

11楼2022-03-30 10:45:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 huangdi5217 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 希望能25博士入学,可提前一年做科研助理 +3 干饭版小太阳 2024-06-09 7/350 2024-06-10 00:05 by 干饭版小太阳
[基金申请] 蹲一个6月7号江苏省青基公示 +17 yulb1005 2024-06-06 30/1500 2024-06-09 23:47 by 易浩天
[教师之家] 难上的课安排给我,杂事安排给我。评优时我就没份儿了,即便我做得不比绝大多数人差 +13 河西夜郎 2024-06-08 13/650 2024-06-09 23:29 by SensorHa
[论文投稿] 给大家分享一下扎心的投稿经历 +8 lizhengke06 2024-06-08 9/450 2024-06-09 23:20 by lyfbangong
[基金申请] 函评意见:既然你有中科院****人才项目了,就不要申请面上了。 +30 zcp521 2024-06-06 33/1650 2024-06-09 22:31 by 3101251516
[论文投稿] 审稿交流 +5 huyugan123 2024-06-08 6/300 2024-06-09 20:00 by nono2009
[基金申请] B01化学口的,近几年要什么样的评价才能上会呀? +4 salmon95 2024-06-06 5/250 2024-06-09 09:45 by chem-cai
[有机交流] 席夫碱反应ph敏感 控制ph在多少呢? 10+4 段sy 2024-06-05 5/250 2024-06-08 23:15 by 段sy
[论文投稿] 求助,锂电池的3区4区英文期刊求助 +7 交界地的懒羊羊 2024-06-06 7/350 2024-06-08 02:23 by 明明在
[教师之家] 最浪漫的事 (金币+5) +6 水冰月月野兔 2024-06-06 6/300 2024-06-07 16:32 by Quakerbird
[论文投稿] 电化学投稿 +4 爱安沐梅梅 2024-06-06 14/700 2024-06-06 21:51 by 爱安沐梅梅
[论文投稿] 审稿快、要求低的SCI四区开源期刊有么? +6 zch哈哈 2024-06-03 7/350 2024-06-06 16:23 by p-cloud
[论文投稿] 博士学的是健康教育,需要自己找课题,哪位大神帮忙指导一下,选什么健康教育课题呢? 30+3 lepeau 2024-06-05 5/250 2024-06-06 11:38 by nono2009
[论文投稿] 二审10天就Required Reviews Completed +6 2021035005 2024-06-03 12/600 2024-06-06 08:58 by 2021035005
[基金申请] 青拔有答辩通知了吗? +6 wuyongxia 2024-06-04 8/400 2024-06-05 22:35 by xiaoyidao129
[基金申请] 各位,F01口的YQ有收到通知的吗? +3 zmm891258 2024-06-05 5/250 2024-06-05 17:06 by godlovewho
[论文投稿] 给编辑发邮件 +3 happy hs 2024-06-03 4/200 2024-06-05 13:51 by p-cloud
[考博] 有没有非全日制的博士 +3 原味儿咖啡 2024-06-03 4/200 2024-06-05 10:37 by 新晋码匠
[论文投稿] 硅酸盐学报审稿费晚交有啥影响没 +4 赵杉嫚 2024-06-03 4/200 2024-06-04 21:20 by topedit
[有机交流] mitsunobu反应求助 15+4 cuicuicb 2024-06-03 5/250 2024-06-04 13:45 by yuanchang
信息提示
请填处理意见