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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 实验技术 » 拟南芥RNA的提取
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lilyhht

铜虫 (正式写手)

[求助] 拟南芥RNA的提取 已有1人参与

各位前辈，我在提取RNA的过程中发现，在用异丙醇沉淀RNA时会出现大量的白色沉淀，RNA不易溶解，260/280=1.8左右，260/230=0.6。我给测序公司打电话咨询说260/230=0.6不符合高通量测序要求，要大于1.5。
不知怎样减少这些白色钙化物质的污染？
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我想有所作为，但找不到方向，我该干什么，从哪里开始。
1楼 2014-08-12 23:26:38
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zero19871029

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lilyhht: 金币+5 2014-08-14 08:51:32
应该是之前的几部没有做好，用的是trizon提取的吗
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2楼2014-08-13 18:06:41
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lilyhht

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zero19871029 at 2014-08-13 18:06:41
应该是之前的几部没有做好，用的是trizon提取的吗

是用RNAiso Plus 提取的，类似trizonl，第一步加的是RNAiso Plus，后面的步骤一样，异丙醇沉淀后，有白色沉淀，用75%酒精洗，最后加水有溶的，但是不完全融掉，好像是杂质，白色的，说不清是什么，我就离心，取上清，白色的不要了，结果260/230>1.0了。不知道大家提取的时候有没有类似情况，总不能每次都是最后一步加水再离心吧，好像浪费很多RNA。求解答，谢谢。
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我想有所作为，但找不到方向，我该干什么，从哪里开始。
3楼2014-08-14 08:59:19
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ahhngwj

木虫 (小有名气)
额。。。如果没记错，这个白色的应该就是RNA啊。。。可以加DEPC水溶解，还是不溶解的话，55度助融。
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4楼2014-08-16 09:02:59
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zero19871029

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lilyhht at 2014-08-14 08:59:19
是用RNAiso Plus 提取的，类似trizonl，第一步加的是RNAiso Plus，后面的步骤一样，异丙醇沉淀后，有白色沉淀，用75%酒精洗，最后加水有溶的，但是不完全融掉，好像是杂质，白色的，说不清是什么，我就离心，取上清 ...

我也遇到过这种情况，当时我是因为磨的叶片太多了，估计是超出了trizol的提取能力~
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5楼2014-08-18 11:44:47
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lilyhht

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zero19871029 at 2014-08-18 11:44:47
我也遇到过这种情况，当时我是因为磨的叶片太多了，估计是超出了trizol的提取能力~...

6楼2014-08-18 17:39:01
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