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汕头大学海洋科学接受调剂
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lilyhht

铜虫 (正式写手)

[求助] 拟南芥RNA的提取 已有1人参与

各位前辈,我在提取RNA的过程中发现,在用异丙醇沉淀RNA时会出现大量的白色沉淀,RNA不易溶解,260/280=1.8左右,260/230=0.6。我给测序公司打电话咨询说260/230=0.6不符合高通量测序要求,要大于1.5。
不知怎样减少这些白色钙化物质的污染?
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我想有所作为,但找不到方向,我该干什么,从哪里开始。
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zero19871029

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lilyhht: 金币+5 2014-08-14 08:51:32
应该是之前的几部没有做好,用的是trizon提取的吗
2楼2014-08-13 18:06:41
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lilyhht

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zero19871029 at 2014-08-13 18:06:41
应该是之前的几部没有做好,用的是trizon提取的吗

是用RNAiso Plus 提取的,类似trizonl,第一步加的是RNAiso Plus,后面的步骤一样,异丙醇沉淀后,有白色沉淀,用75%酒精洗,最后加水有溶的,但是不完全融掉,好像是杂质,白色的,说不清是什么,我就离心,取上清,白色的不要了,结果260/230>1.0了。不知道大家提取的时候有没有类似情况,总不能每次都是最后一步加水再离心吧,好像浪费很多RNA。求解答,谢谢。
我想有所作为,但找不到方向,我该干什么,从哪里开始。
3楼2014-08-14 08:59:19
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ahhngwj

木虫 (小有名气)

额。。。如果没记错,这个白色的应该就是RNA啊。。。可以加DEPC水溶解,还是不溶解的话,55度助融。
4楼2014-08-16 09:02:59
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zero19871029

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lilyhht at 2014-08-14 08:59:19
是用RNAiso Plus 提取的,类似trizonl,第一步加的是RNAiso Plus,后面的步骤一样,异丙醇沉淀后,有白色沉淀,用75%酒精洗,最后加水有溶的,但是不完全融掉,好像是杂质,白色的,说不清是什么,我就离心,取上清 ...

我也遇到过这种情况,当时我是因为磨的叶片太多了,估计是超出了trizol的提取能力~
5楼2014-08-18 11:44:47
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lilyhht

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zero19871029 at 2014-08-18 11:44:47
我也遇到过这种情况,当时我是因为磨的叶片太多了,估计是超出了trizol的提取能力~...

6楼2014-08-18 17:39:01
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