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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 连T载体失败
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cos-play

银虫 (初入文坛)

[求助] 连T载体失败 已有2人参与

我的目的片段最大4.3kb，连T载体总是失败，PCR有P出特征性条带，就是连不上T载体，酶切都没问题，是怎么回事啊，求救呀
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1楼 2014-08-10 20:22:12
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
扩大片段和质粒的比例试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-08-11 08:02:46
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499649610

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
连接时间也该适当延长
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3楼2014-08-11 09:17:19
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cos-play

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-08-11 08:02:46
扩大片段和质粒的比例试试

做完连接转化之前，有跑凝胶电泳，还有目的片段作为对照，显示有两个连上了，可是转化之后，挑点摇菌快检总是空载，送测序也是空的，感觉很奇怪
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4楼2014-08-11 12:26:12
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cos-play

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 499649610 at 2014-08-11 09:17:19
连接时间也该适当延长

我是16度，连接过夜，而且连接后有跑凝胶电泳检测，目的片段做对照，显示有两个连接上了，可是转化后，挑点摇菌快检显示全部空载，十分不理解
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5楼2014-08-11 12:28:33
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zhaodahe

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cos-play at 2014-08-11 12:26:12
做完连接转化之前，有跑凝胶电泳，还有目的片段作为对照，显示有两个连上了，可是转化之后，挑点摇菌快检总是空载，送测序也是空的，感觉很奇怪...

你跑电泳能看到连接后的条带？有图吗？
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6楼2014-08-11 12:58:32
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