应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 连接转化后AMp培养基上长不出来
51/1返回列表
查看: 1818  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

er66668888

铜虫 (初入文坛)

[求助] 连接转化后AMp培养基上长不出来 已有3人参与

最近在做18sDNA的克隆文库 用切胶回收的全长的18sDNA（扩增用的extaq酶）大概1.8kb连接PMD18T载体 然后转入感受态细胞过夜培养 第二天什么也没有 用质粒做过连接转化能长出来 虽然不多但也有一两百个，我连接体系是solution5微升，vector0.5微升，DNA4.5微升，连接了有10个小时，回收的片段也很亮，为什么长不出来呢，连接时间继续延长还是换更高效率的感受态细胞，师姐门虽然据说他们以前做的感受态用质粒做比我的长得好，但应该不是主要原因吧 他们片段只有700bp，但我的也不算很长吧 问题在哪呢 再做几次失败的话我又得重新扩了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-08-05 15:19:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

M130150388

新虫 (初入文坛)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-08-13 21:28:51
连接体系换一下试一试，载体变为1微升，模板4微升，solution5微升
赞一下 回复此楼
6楼2014-08-13 20:34:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

biolinker

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
er66668888(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-08-13 21:28:36
1、考虑一下感受态的问题
2、考虑一下是否是Amp的问题
3、考虑一下连接的问题

建议多做一些平行实验，可以借你师姐以前做的一起做一下，做个对比。看是不是操作的问题。做实验可以做对照组。
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-05 16:29:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

er66668888

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biolinker at 2014-08-05 16:29:02
1、考虑一下感受态的问题
2、考虑一下是否是Amp的问题
3、考虑一下连接的问题

建议多做一些平行实验，可以借你师姐以前做的一起做一下，做个对比。看是不是操作的问题。做实验可以做对照组。

能否详细一些 师姐们做的都没有了
赞一下 回复此楼
3楼2014-08-05 18:11:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-08-13 21:28:41
片段和载体最好还是按照摩尔比1:3-1:5计算下再连接。     也可以不用solution，直接用T4酶。
赞一下 回复此楼
4楼2014-08-05 18:46:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭