| 查看: 3337 | 回复: 21 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
cathy97031新虫 (初入文坛)
|
[求助]
基因组PCR用于验证RT-PCR引物的实验思路，请大虾们把把关 已有7人参与
|
|
|
本人要做昆虫组织中某种基因的表达谱研究，现初拟实验方案如下，因实验第一步就出问题了，所以请各位大虾把把关，是我的方案本身就有问题还是实验操作的问题，也请有经验者给点建议： 1、网上数据库中查到该物种相关基因的所有序列信息，但是不确定这些基因是否都表达，所有要通过RT-PCR来验证。 2、做RT-PCR之前为了确保引物的可用性，本人根据这些序列信息在外显子区域选择合适片段作为引物，而扩增出来的片段夸内含子区域，大小在1000bp左右。 3、用天根的快速DNA提取试剂盒提取该昆虫的基因组DNA，用设计好的引物进行PCR扩增。 4、能够扩增出对应大小的片段即说明该对引物可用于后续的RT-PCR实验。 5、RT-PCR  ...... 但是现在遇到的问题是，我提取的基因组DNA怎么都扩增不出条带来，除了引物二聚体其他什么都没有，引物试了好几对都是一样的结果；就在这时，我发现基因组提取试剂盒过期了至少两个月。于是我就不知道是因为试剂盒过期导致的基因组提取失败还是我的引物有问题，我目前没有扩增过该昆虫的任何基因，所以没办法做对照实验，那我该怎么办啊？试剂盒的保质期就那么严格的吗？还是我的实验本身就有问题呢？请大家评评...... |
回复此楼» 猜你喜欢
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有163人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
-
133 Ų 的极性表面积，如何决定 TNG462 的母液配制与色谱条件
已经有0人回复
-
两个氟原子与一段氨基甲酸甲酯：BLU-5937 的母液配制与稳定性边界
已经有0人回复
-
司美那非（TPN171）：从嘧啶酮母核到工艺放大的结构、色谱与质控参数解析
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 这个验证可行吗？
已经有18人回复
- 用基因组DNA进行PCR怎么设计引物啊
已经有10人回复
- RT-PCR, q-PCR, 和qRT-PCR的引物可以相同吗？
已经有3人回复
- 使用多对引物进行实时定量PCR后未得到实验结果，是否能说明目的基因不表达？
已经有10人回复
- 做verticillium dahliae(大丽轮枝菌）的RT-PCR，actin 基因引物的问题
已经有3人回复
- RT—PCR引物、条带问题，新手求助，求意见，求建议！
已经有9人回复
- 水稻RT -PCR引物设计
已经有7人回复
- RT-PCR引物稀释问题，欢迎战友们进来指导！急盼中
已经有16人回复
- 大家做RT-qPCR设计引物用的什么软件呀？
已经有15人回复
- PCR引物TM值的确定
已经有13人回复
- rt-pcr图，请大神们帮助分析一下，急。。。谢谢。。。
已经有20人回复
- 实时荧光RT-PCR实验的相关问题
已经有8人回复
- PCR引物设计的问题
已经有8人回复
- DGGE引物，real-time PCR引物和 clone library引物 的转化问题
已经有8人回复
- 做RT-PCR时该用哪段氨基酸序列设计引物
已经有6人回复
- 关于定量pcr的体系，RT-pcr，Q-pcr
已经有3人回复
- 【求助/交流】荧光定量PCR与半定量的RT－PCR在设计引物时有什么区别？
已经有8人回复
- 【求助/交流】求教基因预测及RT-PCR引物设计问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】稀释ＰＣＲ引物用的ＴＥ
已经有16人回复
- 【求助/交流】qrt-pcr引物是否要纯化
已经有4人回复
- 【求助/交流】PCR只有引物二聚体，有图
已经有20人回复
cathy97031
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 229.5
- 帖子: 27
- 在线: 29小时
- 虫号: 2147515
- 注册: 2012-11-25
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
6楼2014-07-29 15:15:53
2楼2014-07-29 13:18:54
3楼2014-07-29 14:14:58
luwei13566
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 184 (高中生)
- 金币: 4352.9
- 散金: 97
- 红花: 35
- 帖子: 641
- 在线: 261.1小时
- 虫号: 2380655
- 注册: 2013-03-27
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2014-07-29 14:28:47
