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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » taqman探针进行荧光定量PCR结果分析
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wyf625356

铁虫 (小有名气)

[求助] taqman探针进行荧光定量PCR结果分析 已有2人参与

我需要扩增的DNA序列是CACGCGGTTCTGGTATGAAAGAAACCGCTGCTGCTAAATTCGAACGCCAGCACATGGACAGCCCAGATCTGGGTACCGACGACGACGACAAGGCCATGGCTGATATCGGATCCGAATTCGAGCTC（125bp）
设计的引物及探针如下
PRIMER  F:         CACGCGGTTCTGGTATGA（18bp）
PRIMER  R:         GAGCTCGAATTCGGATCC （18bp）
taqman探针（报告基团JOE）        CCGCTGCTGCTAAATTCGAAC    （21bp）

实时荧光定量pcr扩增条件
93℃   120s
93℃   10s
60℃  30s，cycles45

但是结果如图1，没有明显的荧光对数增长曲线


我跑琼脂糖凝胶电泳，图2结果，1是marker，2是探针，3,是Taqman的扩增结果4,是常规PCR结果

其中第三道有杂条带，大家帮我分析一下，没有荧光的原因

taqman探针进行荧光定量PCR结果分析
fig.1.png


taqman探针进行荧光定量PCR结果分析-1
fig.2.jpg
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1楼 2014-07-23 15:34:24
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vege的桌子

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
探针的TM值比引物高多少？
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2楼2014-07-23 16:31:47
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wyf625356

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by vege的桌子 at 2014-07-23 16:31:47
探针的TM值比引物高多少？

引物是61.3，61.1，探针是69.7
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3楼2014-07-24 14:01:29
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引物偏短，我的软件预测你的引物Tm在54℃、56℃，Tm低。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-07-24 17:46:00
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wyf625356

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-07-24 17:46:00
引物偏短，我的软件预测你的引物Tm在54℃、56℃，Tm低。

可是我扩增条带，跑胶是有的目的条带的；另外我自己的软件温度是有60℃的
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5楼2014-07-25 09:12:24
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wyf625356 at 2014-07-25 09:12:24
可是我扩增条带，跑胶是有的目的条带的；另外我自己的软件温度是有60℃的...

你用55℃退火条件看看
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6楼2014-07-25 11:11:20
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syy5840

新虫 (初入文坛)
请问问题解决没有，我也遇到了同样的问题，恳请楼主给予帮助！
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7楼2016-12-24 13:44:16
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永不言弃！！

铜虫 (初入文坛)
同问
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拒绝长大但要不断成长
8楼2019-08-27 13:45:33
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