24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 2478  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wyf625356

铁虫 (小有名气)

[求助] taqman探针进行荧光定量PCR结果分析 已有2人参与

我需要扩增的DNA序列是CACGCGGTTCTGGTATGAAAGAAACCGCTGCTGCTAAATTCGAACGCCAGCACATGGACAGCCCAGATCTGGGTACCGACGACGACGACAAGGCCATGGCTGATATCGGATCCGAATTCGAGCTC(125bp)
设计的引物及探针如下
PRIMER  F:         CACGCGGTTCTGGTATGA(18bp)
PRIMER  R:         GAGCTCGAATTCGGATCC (18bp)
taqman探针(报告基团JOE)        CCGCTGCTGCTAAATTCGAAC    (21bp)

实时荧光定量pcr扩增条件
93℃   120s
93℃   10s
60℃  30s,cycles45

但是结果如图1,没有明显的荧光对数增长曲线


我跑琼脂糖凝胶电泳,图2结果,1是marker,2是探针,3,是Taqman的扩增结果4,是常规PCR结果

其中第三道有杂条带,大家帮我分析一下,没有荧光的原因

taqman探针进行荧光定量PCR结果分析
fig.1.png


taqman探针进行荧光定量PCR结果分析-1
fig.2.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syy5840

新虫 (初入文坛)

请问问题解决没有,我也遇到了同样的问题,恳请楼主给予帮助!
7楼2016-12-24 13:44:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

vege的桌子

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
探针的TM值比引物高多少?
2楼2014-07-23 16:31:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wyf625356

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by vege的桌子 at 2014-07-23 16:31:47
探针的TM值比引物高多少?

引物是61.3,61.1,探针是69.7
3楼2014-07-24 14:01:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引物偏短,我的软件预测你的引物Tm在54℃、56℃,Tm低。
4楼2014-07-24 17:46:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 药学305求调剂 +6 玛卡巴卡boom 2026-04-11 6/300 2026-04-14 19:48 by zhouxiaoyu
[考研] 求调剂 +9 小聂爱学习 2026-04-11 13/650 2026-04-14 19:18 by Art1977
[考研] 材料相关专业344求调剂双非工科学校或课题组 +21 hualkop 2026-04-12 22/1100 2026-04-14 17:44 by lhj2009
[考研] 071000生物学调剂求助 +18 zzzzwww 2026-04-09 21/1050 2026-04-14 15:39 by zs92450
[考研] 农学0904 312求调剂 +4 Say Never 2026-04-11 4/200 2026-04-14 09:10 by zs92450
[考研] 一志愿华南理工大学331分材料求调剂 +10 天下ww 2026-04-09 11/550 2026-04-13 23:25 by pies112
[考研] 一志愿211 0703化学 346分求调剂 +26 土豆er? 2026-04-09 29/1450 2026-04-13 15:15 by 独醉梦孤城
[考研] 一志愿双非085400电子信息344 求调剂,对材料和化学方向也感兴趣 +12 无情的小羊 2026-04-09 13/650 2026-04-13 14:17 by 张zhihao
[考研] 0854调剂 +10 长弓傲 2026-04-11 11/550 2026-04-13 10:38 by wp06
[考研] 295分求调剂 +13 ?要上岸? 2026-04-10 13/650 2026-04-12 15:37 by laoshidan
[考研] 296求调剂 +14 汪!?! 2026-04-10 16/800 2026-04-12 10:48 by zhouyuwinner
[考研] 291求调剂 +8 关忆北. 2026-04-11 8/400 2026-04-12 09:32 by 逆水乘风
[考研] 化工调剂求导师收留!一志愿失利,踏实肯干,有植物提取科研经历 +20 yzyzx 2026-04-09 21/1050 2026-04-12 00:12 by 小小小小啦啦啦
[考研] 303求调剂 +14 SereinQ 2026-04-10 15/750 2026-04-11 20:43 by 蓝云思雨
[考研] 085410 273分调剂 +4 X1999 2026-04-09 4/200 2026-04-11 13:05 by pies112
[考研] 0854调剂 +8 950824he@ 2026-04-09 8/400 2026-04-11 10:11 by zhq0425
[考研] 344求调剂 +7 丶风雪夜归人丶 2026-04-09 7/350 2026-04-10 12:05 by pengliang8036
[考研] 070300化学 求调剂 +13 73372112 2026-04-08 13/650 2026-04-09 20:22 by maddjdld
[考研] 337求调剂 +4 Gky09300550, 2026-04-09 4/200 2026-04-09 17:18 by 帕尔马拉特
[考研] 求机械专硕297第二批调剂 +5 拾柒12。 2026-04-08 5/250 2026-04-09 16:43 by 允当适度
信息提示
请填处理意见